1、本文對山羊干擾素-γ與白細胞介素-2的克隆、原核表達及其抗血清的制備進行了探討。本研究根據(jù)GenBank上發(fā)表的山羊干擾素-γ和白細胞介素-2基因序列，設計了兩套引物。應用RT-PCR方法從山羊外周血淋巴細胞中分別克隆了二者，將其克隆到pMD18-T載體中，經(jīng)酶切鑒定、PCR鑒定及DNA測序分析，表明擴增片段分別為山羊IFN-γ和IL-2基因。測序結(jié)果顯示克隆的IFN-γ基因全長501個核苷酸，編碼166個氨基酸，該基因與GenBank

2、發(fā)表的山羊干擾素-γ基因序列比較，核苷酸/氨基酸序列同源性為99.4％。經(jīng)SignalP 3.0分析表明，前23個氨基酸為信號肽序列；IL-2基因開放閱讀框架共有468bp，編碼一條155個氨基酸的多肽，與GenBank發(fā)表的山羊白細胞介素-2基因序列(AF535145)比較核苷酸/氨基酸同源性為100.0％，與應琦華等的山羊IL-2序列的同源性為99.1％，前20個氨基酸為該蛋白的信號肽序列。應用DNA重組技術，將IL-2基因和去除信

3、號肽的IFN-γ基因分別插入到原核表達載體pET-30a(+)的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ位點上，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET30a-CaplL-2和pET30a-CaplFN-γ，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG誘導后進行SDS-PAGE電泳，結(jié)果表明目的基因在大腸桿菌中以包涵體形式融合表達。分別用ProBond<'TM>蛋白純化試劑盒純化，用所獲得的重組蛋白純化產(chǎn)物經(jīng)三次背部皮下多點注射新西蘭白兔，制備了兔抗山羊IFN-γ和兔抗山羊IL-