1、本文從問號鉤體賴型賴株的全基因組序列中隨機挑選了11種預(yù)測的外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因作為候選疫苗所需的潛在抗原分子，進行克隆和表達。用SDS-PAGE電泳和ELISA對表達產(chǎn)物進行了鑒定。表達產(chǎn)物純化后免疫新西蘭兔，獲得相應(yīng)抗血清。用ELISA和顯微凝集試驗(MAT)分別測定了抗血清效價和抗體活性。另外，本文將培養(yǎng)的處于對數(shù)期的15種致病性鉤體的菌體蛋白進行SDS-PAGE電泳，用獲得的各種抗外膜蛋白或相關(guān)蛋白兔抗血清作Immunoblo

2、t檢測，獲得各種外膜組分在不同致病性鉤體中的初步分布情況。通過RT-PCR和Immunoblot方法對15株致病性鉤體中這11種基因分別從基因和蛋白水平進行檢測。已經(jīng)完成的結(jié)果顯示在11種鉤體外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因中LA2295，LA2873和LA3138三種基因在致病性問號鉤體賴型賴株都有表達。接著，根據(jù)問號鉤體賴型賴株這三種外膜蛋白或相關(guān)蛋白基因序列設(shè)計引物，本文以15種鉤體的基因組DNA為模板分別作PCR擴增這三種外膜蛋白或相關(guān)蛋