1、我們?cè)谂糠蛛x和克隆與腦發(fā)育及功能維持相關(guān)的cDNA時(shí),從人的胎腦文庫中克隆到一個(gè)全長cDNA-hRTN3及小鼠的同源基因mRTN3,它們均屬于RTN（reticulon）家族.hRTN3 cDNA全長2559bp,含有一個(gè)編碼236個(gè)氨基酸殘基的開放閱讀框架.序列的第137-139位核苷酸為起始密碼子,旁側(cè)序列符合Kozak規(guī)律,在開放性閱讀框架5'上游有一個(gè)框內(nèi)終止密碼子,3'有典型的加尾信號(hào),這些特點(diǎn)均顯示該序列為一全長的cDNA

2、.此cDNA序列已送至GenBank登錄,接受號(hào)為AF119297.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示mRTN3在大腦皮層、海馬、丘腦、腦干的神經(jīng)核團(tuán)及脊髓的非膠質(zhì)細(xì)胞中有強(qiáng)信號(hào).為進(jìn)一步了解hRTN3蛋白的亞細(xì)胞定位,我們構(gòu)建真核表達(dá)載體,使hRTN3cDNA編碼區(qū)重組到綠色熒光蛋白基因的上游,并用脂質(zhì)體（Lipofectamine）轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞,48小時(shí)后得到高效表達(dá).通過共聚焦顯微鏡觀察到融合蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)中,呈不均勻分布,結(jié)合hRTN3 C末端

3、所具有的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的錨定序列KKXX,由此推斷該蛋白位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,hRTN3在正常腦組織中主要為神經(jīng)元大量表達(dá),在膠質(zhì)細(xì)胞中基本無信號(hào);在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中,hRTN3在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量明顯提高;但是在不同惡性程度的膠質(zhì)細(xì)胞瘤中,其表達(dá)量未見明顯差異.因此,我們推測hRTN3基因表達(dá)量的改變很可能是膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生過程中的一個(gè)早期事件.此外為鑒定hRTN3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的相互作用蛋白,推斷hRTN3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能,我們