1、妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是孕期常見的并發(fā)癥之一,其臨床經過復雜,嚴重威脅母兒安全。GDM的發(fā)病機制尚不清,經典的觀點認為孕期胎盤泌乳素、催乳素、孕激素及糖皮質激素等拮抗胰島素激素水平的升高及其造成的胰島素抵抗狀態(tài)是GDM發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)。但難以解釋的是,在妊娠期婦女普遍存在生理性胰島素抵抗的情況下為何GDM孕婦發(fā)病。近年來研究發(fā)現一些炎癥因子、脂肪因子的改變在妊娠期胰島素抵抗

2、中起重要作用,這為我們進一步探索GDM的發(fā)病機制提供了新的思路。2005年,日本學者用差異顯示法發(fā)現了一個在內臟脂肪組織特異性高表達的脂肪因子,命名為內脂素(visfatin)?；谄漕愐葝u素、炎癥因子、輔酶1(NAD)合成等多種生物學作用,visfatin成為NAD生物學、代謝、炎癥等眾多領域的研究熱點。GDM患者存在復雜的代謝和炎癥等改變,但目前對于visfatin與GDM的關系了解甚少。本研究中,首先檢測了正常妊娠孕婦和GDM孕婦

3、血清visfatin表達水平的差異,了解血清visfatin的改變與GDM的相關性。在此基礎上,研究了visfatin在正常妊娠孕婦及GDM孕婦皮下脂肪組織、內臟脂肪組織及胎盤組織中表達的改變,分析血清visfatin的主要來源,并進一步用離體細胞實驗觀察了visfatin表達的調控,旨在探討visfatin在GDM發(fā)病中的作用。
　　第一部分正常妊娠孕婦和妊娠期糖尿病孕婦血清visfatin的表達
　　目的：了解正常妊娠孕

4、婦與GDM孕婦血清visfatin表達水平的差異,探討其與GDM的相關性。
　　方法：選擇2008年12月~2009年3月在復旦大學附屬婦產科醫(yī)院產科門診行常規(guī)產前檢查并足月入院行擇期剖宮產的孕婦。其中正常對照組22例,GDM組20例。檢測人體測量參數和生化指標。采用ELISA方法檢測兩組產前及產后3日血清及臍血visfatin的含量。用最小穩(wěn)態(tài)模型計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR)：空腹血糖(FPG)×空腹胰島素(FINS)/

5、22.5。比較兩組的檢測結果。
　　結果：1)GDM組餐后一小時血糖(1hPG)、FINS、HOMA_IR、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)水平顯著高于正常對照組,存在明顯的胰島素抵抗。2)與正常對照組相比,GDM孕婦血清visfatin水平顯著升高([7.9±a2.0]vs.[6.2±1.4]ng/ml,p=0.004),產后3日GDM孕婦血清visfatin水平較產前明顯下降([7.9±2.0]vs.[6.3±1.7]ng/ml

6、,p=0.025)。正常對照組孕婦產后血清visfatin水平呈下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。正常對照組和GDM組胎兒臍血visfatin水平無顯著性差異(p>0.05)。臍血visfatin水平與新生兒出生體重呈顯著正相關(r=0.513,p=0.001)。3)研究對象總體中visfatin與1hPG呈顯著正相關(r=0.432,p=0.004)。多因素Logistic逐步回歸分析結果顯示校正1hPG后visfatin

7、(B=0.827,p=0.011,OR=2.287,95％CI1.213~4.311)、FINS(B=0.416,p=0.031,OR=I.517,95％CI1.039~2.213)是GDM的獨立影響因素。
　　結論：GDM孕婦血清visfatin水平顯著升高,產后短期內較產前明顯下降,血清visfatin水平是GDM的獨立影響因素。Visfatin可能通過炎癥等非胰島素作用途徑參與GDM的發(fā)生和發(fā)展。臍血visfatin的水平可

8、以間接反映胎兒脂肪儲備情況,也許可以作為巨大兒的預測因子。
　　第二部分Visfatin在皮下脂肪組織、內臟脂肪組織及胎盤組織中的表達
　　目的：檢測正常妊娠孕婦與GDM孕婦皮下脂肪組織、內臟脂肪組織(大網膜)和胎盤組織中visfatin mRNA及蛋白表達的差異及其表達定位,以探討不同組織中visfatin的表達與GDM的關系。
　　方法：選擇上述住院手術分娩的GDM孕婦(n=20)和正常妊娠孕婦(n=22),術中收

9、集標本。分別用免疫組化、RT-PCR和western blot測定法檢測兩組皮下脂肪組織、大網膜及胎盤組織中visfatin mRNA及蛋白表達的情況,比較兩組的檢測結果。
　　結果：GDM組孕婦胎盤組織visfatin的mRNA水平和蛋白水平均顯著高于正常對照組孕婦(p=0.014,p=0.006),并且與血清visfatin水平顯著正相關(r=0.512,p=0.015;r=0.819,p=0.046)。而兩組大網膜及皮下脂肪

10、組織visfatin的表達無明顯差異(p>0.05),脂肪組織visfatin的表達與血清visfatin水平無明顯相關性(p>0.05)。胎盤組織中visfatin的表達部位主要為合體滋養(yǎng)細胞,以胞漿表達為主。
　　結論：胎盤組織visfatin的過度表達是GDM孕婦血清visfatin水平升高的主要來源。脂肪組織visfatin的表達與GDM的關系不明顯。胎盤組織分泌的visfatin不僅參與GDM的發(fā)生和發(fā)展,還可能參與調解

11、母胎之間葡萄糖的轉運,與巨大兒等并發(fā)癥的發(fā)生有關。
　　第三部分 TNF-a對滋養(yǎng)細胞visfatin表達的調控
　　目的：GDM孕婦胎盤組織中visfatin的過度表達,是導致血循環(huán)中visfatin水平異常增高的主要原因。本研究旨在觀察TNF-a對滋養(yǎng)細胞visfatin表達的調控,探討胎盤滋養(yǎng)細胞visfatin表達的調控機制。
　　方法：運用不同濃度的TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)分別作用人絨

12、癌滋養(yǎng)細胞株BeWo細胞0、24、48和72h。采用RT-PCR及western blot檢測BeWo細胞及培養(yǎng)液中visfatin轉錄水平和蛋白水平的變化。
　　結果：BeWo細胞培養(yǎng)24、48、72h后細胞及細胞外培養(yǎng)液中均有visfatin蛋白的表達。與空白對照相比,培養(yǎng)48小時后,隨著TNF-a濃度的增加,細胞外培養(yǎng)液中visfatin蛋白的表達量顯著增加,而細胞內visfatin mRNA的含量隨著TNF-a濃度的增加明