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![Pichia anomala 0732-1發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化及其抑菌成分的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/5df1962a-14cb-4a8b-af17-7e6115a970fd/5df1962a-14cb-4a8b-af17-7e6115a970fd1.gif)
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文檔簡介
1、背景:瓜類細菌性果斑病是哈密瓜生產(chǎn)中一種毀滅性病害,也是國內外重大檢疫性植物病害。本試驗研究對象 P. anomala0732-1能代謝產(chǎn)生對哈密瓜果斑病病原菌燕麥嗜酸菌西瓜亞種(Acidovora avenae subsp. citrulli)有較好抑制作用的物質,簡稱ABS。
目的:通過對P. anomala0732-1產(chǎn)ABS發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化、抑細菌物質(ABS)成分分析、ABS誘導寄主抗性測定、添加佐劑對 P. ano
2、mala0732-1抑菌效果影響4個方面進行研究,以期為P. anomala0732-1有效防治哈密瓜細菌性果斑病提供理論和實踐依據(jù)。
方法:采用單因子篩選和響應面試驗設計優(yōu)化產(chǎn)ABS的發(fā)酵培養(yǎng)基;利用核磁共振(NMR)、氣相色譜-質譜連用(GC-MS)和高效液相色譜(HPLC)分析ABS成分及抑菌活性;通過哈密瓜葉片噴霧接種P. anomola0732-1的發(fā)酵液,分時段連續(xù)測定葉片組織內SOD、POD、PPO和PAL酶活變
3、化,驗證P. anomola0732-1誘導寄主抗性的生防類型;分別利用平板抑菌圈法和幼果活體試驗測定氯化鈣、2-脫氧-D-葡萄糖和茉莉酮酸甲酯對P. anomola0732-1抑菌效果的影響。
結果:采用單因子、PB和響應面試驗設計獲得P. anomala0732-1產(chǎn)ABS最優(yōu)培養(yǎng)基:蔗糖為41.2 g、酵母浸膏1.39 g、MgSO41.59 g、蛋白胨5 g、KH2PO41.25 g和H2O1000 mL。通過對ABS
4、成分分析,ABS含有1.1±0.1%乙酸、0.043±0.003%琥珀酸、0.033±0.003%檸檬酸、0.033±0.003%蘋果酸、0.031±0.004%乳酸和0.011±0.001%丙酸。乙酸含量最多,抑菌作用較強。添加佐劑2.5%(w/v)氯化鈣(CaCl2)、36 mM2-脫氧-D-葡萄糖(2 DOG)、200μM茉莉酮酸甲酯(MeJA)能顯著增強P. anomala0732-1對病原菌Aac的抑制效果,其中CaCl2和M
5、eJA對P.anomala0732-1生長無影響。在幼果活體試驗中,2.5%(w/v)的CaCl2和200μM的MeJA與P. anomala0732-1共同作用時顯著抑制了細菌性果斑病病斑的擴展。噴布P. anomola0732-1發(fā)酵液在156 h內均能不同程度誘導哈密瓜葉片抗性酶的增強,其中POD酶活表達最強,在接種發(fā)酵液60 h達到酶活峰值為432.86(U/g)是對照組的1.8倍。
結論:通過響應面試驗設計優(yōu)化P.
6、anomola0732-1發(fā)酵培養(yǎng)基,代謝ABS抑細菌活性提高45.29%。采用不同物質分析檢測結果確定出ABS的主要成分為有機酸類物質,是抑制病原細菌生長的主要物質。接種P. anomola0732-1發(fā)酵液在一定接種時間內相比CK和Aac能誘導哈密瓜幼苗抗性相關酶PAL、SOD、PPO、POD活性的提高,證明了P. anomola0732-1在誘導哈密瓜苗抗性方面具有一定的作用。向P. anomala0732-1發(fā)酵液中添加佐劑Ca
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