1、目的：
　　 1.探討標(biāo)準(zhǔn)貯存條件下貯存時間對保存期內(nèi)機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響。
　　 2.探討濾除白細(xì)胞處理對保存期內(nèi)機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響。
　　 方法：
　　 實驗Ⅰ.不同貯存時間對機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響
　　 1.樣品來源:由溫州市中心血站負(fù)責(zé)隨機(jī)提供合格當(dāng)天機(jī)采血小板樣品20份(每樣品容量均約50ml)。
　　 2.樣本的處理:血站采集的血小板樣品均于采集后

2、5h內(nèi)送達(dá),并立即置于血小板振蕩儀中22℃振蕩保存。然后分別于貯存期第1天、第2天、第3天、第4天和第5天在10000級凈化室內(nèi)采用無菌操作抽取混勻后血小板懸液各5ml,其中3ml立即用于血小板聚集試驗,另外2ml分離上清用于血漿可溶性P-選擇素檢測。
　　 3.檢測項目及方法:本實驗檢測項目包括血小板聚集試驗和血漿可溶性P-選擇素分析兩部分,其中血小板聚集試驗采用光學(xué)法(聚集誘導(dǎo)劑為ADP),血漿可溶性P-選擇素分析采用酶免疫

3、分析法(EIA)。
　　 4.實驗分組:按實驗取樣時距機(jī)采血小板采集完成的時間將機(jī)采血小板分為5組,依次為第1天組(第0～23h,平均第7.0h)、第2天組(第26～47h,平均第32.2h)、第3天組(第49～71h,平均第61.0h)、第4天組(第74～95h,平均第89.4h)和第5天組(第103～118h,平均第112.6h)。
　　 5.統(tǒng)計學(xué)分析:比較上述組間血小板最大聚集率和血漿可溶性P-選擇素的差異,以P

4、＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 實驗Ⅱ.濾除白細(xì)胞處理對保存期內(nèi)機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響
　　 1.樣品來源:由溫州市中心血站負(fù)責(zé)隨機(jī)提供保存時間為第1天(0～24h)和第2天(24～48h)的合格成品各20袋,容量均為250ml左右。
　　 2.樣品處理:在凈化間中用FTS-PL310血小板型白細(xì)胞過濾器濾除機(jī)采血小板中的白細(xì)胞,濾除時流速控制在13～15min/袋。上述保存時間為第1天的機(jī)采血小板和保

5、存時間為第2天的機(jī)采血小板再各自分為2組(每組10袋):其中一組進(jìn)行濾除白細(xì)胞處理(作為實驗組);另一組不進(jìn)行濾除白細(xì)胞處理(作為對照組)。實驗組過濾前、后各留取5ml樣本1份,對照組相隔13～15 min先后留取5ml樣品各1份,其中3ml用于血小板聚集功能檢測,2ml用于血小板表面P-選擇素表達(dá)的檢測分析。
　　 3.檢測項目及方法:本實驗檢測項目包括血小板聚集試驗和血小板表面P-選擇素表達(dá)率分析兩部分,其中血小板聚集試驗采

6、用光學(xué)法(聚集誘導(dǎo)劑為ADP),血小板表面P-選擇素分析采用流式細(xì)胞術(shù)。
　　 4.實驗分組:機(jī)采血小板按是否進(jìn)行濾白處理分為實驗組(濾白組)和對照組(非濾白組),上述兩組再按機(jī)采血小板的貯存時間再各自分為第1天組和第2天組。
　　 5.統(tǒng)計學(xué)分析:分別對實驗組和對照組處理前、后樣品的血小板聚集功能和血小板表面P-選擇素表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.貯存時間

7、對機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響:隨著貯存時間的延長,保存期內(nèi)機(jī)采血小板的聚集功能降低明顯,第1天組第～5天組的血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為32.5(11～67)、11.0(4～44)、4.0(2～31)、2.0(1～3)和1.0(0～2);與第1天組比,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。第4天組與第5天組的血小板,致聚劑ADP幾乎已完全喪失對其聚集能力的誘導(dǎo)作用,此時血小板最大聚集率均

8、≤3％。以第1天組血小板最大聚集率100％計,第2天組～第5天組的血小板最大聚集率累積下降率[(x±SD)％]分別為(59.1±15.7)％、(84.6±10.2)％、(94.8±2.3)％和(98.5±1.6)％。隨著貯存時間的延長,機(jī)采血小板血漿可溶性P-選擇素濃度有逐漸升高的趨勢,第1天組～第5天組的可溶性P-選擇素濃度[x±SD,ng/ml]分別為9.88±1.60、11.95±1.89、14.56±3.20、17.56±4.0

9、5、21.21±4.54;與第1天組比,組間均有顯著性差異(P＜0.05)。以第1天組P選擇素濃度為基數(shù),第2天組～第5天組的P-選擇素累積上升率[(x±SD)％分別為(24.4±11.4)％,(47.1±18.3)％,(75.5±23.3)％和(114.6±32.1)％。
　　 2.濾白處理對不同貯存時間機(jī)采血小板聚集和活化功能的影響:貯存時間為第1天的機(jī)采血小板濾白處理前、后血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～

10、最大值(max)分別為38.5(23～65)、36.5(19～61),兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為34.5(18～59)、33.0(16～55),兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);貯存時間為第2天的機(jī)采血小板濾白處理前、后最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為18.0(9～39

11、)、15.5(6～34);兩組間比較差異無統(tǒng)學(xué)意義(P＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為16.5(8～35)、14.5(7～32),兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。貯存時間為第1天的機(jī)采血小板濾白處理前、后血小板表面P-選擇素的表達(dá)率[(x±SD)％]分別為(6.41±2.85)％和(8.34±2.55)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p

12、＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板表面P-選擇素的表達(dá)率[(x±SD)％]分別為(5.74±2.76)％和(6.32±2.46)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。貯存時間為第2天的機(jī)采血小板濾白處理前、后血小板表面P-選擇素的表達(dá)率[(x±SD)％]分別為(6.62±2.11)％和(7.86±2.71)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05))。對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣血小板表面P-選

13、擇素的表達(dá)率[(x±SD)％]分別為(6.06±2.90)％和(6.97±2.83)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.機(jī)采血小板在保存期內(nèi)存在持續(xù)的保存損傷和體外活化,貯存3天后的機(jī)采血小板幾乎已完全喪失對ADP誘導(dǎo)聚集的反應(yīng)能力,為了減少血小板的保存損傷和保證血小板的輸注療效,應(yīng)用于臨床的機(jī)采血小板貯存期最好不要超過2天。
　　 2.應(yīng)用血小板專用型白細(xì)胞濾器對貯存期在2