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![具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光特性的四苯基乙烯在細(xì)胞成像中的應(yīng)用及細(xì)胞毒性檢測(cè).pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/055eacc8-7a02-42e1-83af-b18451a600d9/055eacc8-7a02-42e1-83af-b18451a600d91.gif)
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1、背景:熒光分子成像是利用熒光分子探針標(biāo)記特定的分子或細(xì)胞,顯示活體狀態(tài)下組織水平、細(xì)胞和亞細(xì)胞水平的分子,并對(duì)其生物學(xué)行為在影像方面進(jìn)行定性和定量研究的科學(xué)。
(1)利用熒光分子探針成像具有靈敏度高、快捷方便、時(shí)間分辨率高、費(fèi)用低等諸多優(yōu)點(diǎn)
(2)在生物學(xué)及醫(yī)學(xué)研究中已廣泛應(yīng)用。然而傳統(tǒng)熒光分子探針在使用中普遍存在的一個(gè)問(wèn)題是:當(dāng)熒光官能團(tuán)聚集時(shí)易發(fā)生熒光減弱或淬滅的現(xiàn)象
(3),即當(dāng)發(fā)光分子在
2、聚集狀態(tài)下會(huì)發(fā)生發(fā)光減弱甚至不發(fā)光的現(xiàn)象。2001年Tang研究組發(fā)現(xiàn)了聚集誘導(dǎo)發(fā)光(aggregation-induced emission,AIE)現(xiàn)象,是指一類(lèi)熒光生色團(tuán)在溶液狀態(tài)下微弱發(fā)光甚至不發(fā)光,而在固態(tài)或聚集狀態(tài)下熒光顯著增強(qiáng)的一種光物理現(xiàn)象
(4),意味著利用這類(lèi)熒光基團(tuán)作為熒光探針相對(duì)于傳統(tǒng)熒光探針具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。但目前關(guān)于具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光特性的熒光分子探針在細(xì)胞染色的部位以及對(duì)細(xì)胞的活性及凋亡的影響
3、等方面尚未見(jiàn)研究。在具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光性質(zhì)的化合物中,四苯基乙烯(tetraphenylethene,TPE)及其衍生物在聚集狀態(tài)時(shí)能發(fā)出很強(qiáng)的藍(lán)色熒光
(5),其發(fā)光性能優(yōu)良,合成較為簡(jiǎn)便,以TPE及其衍生物作為探針是AIE現(xiàn)象在生物檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用的一個(gè)重要組成部分。
目的:研究TPE的細(xì)胞染色部位,并分別檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的生長(zhǎng)活性及細(xì)胞凋亡的影響。
方法:
(1)使用Ea
4、gle極限必需培養(yǎng)基(Eagle’s Minimal Essential Medium,MEM)培養(yǎng)人宮頸癌細(xì)胞株HeLa;
(2)Dulbecoo改良的Eagle培養(yǎng)基(Dulbecoo’s modification of Eagle’s Medium,DMEM)培養(yǎng)人乳腺成纖維細(xì)胞(Human breast fibroblasts,HMF);
(3)采用McMurry反應(yīng)合成TPE,加入二甲基亞砜(Dim
5、ethyl sulfoxide,DMSO)中使其呈完全溶解狀態(tài),與固態(tài)TPE對(duì)比熒光強(qiáng)度,檢測(cè)其AIE特性;
(4)TPE完全溶解后稀釋成不同濃度,加入培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞;
(5)不同濃度處理的細(xì)胞在相同的放大倍數(shù)和曝光時(shí)間下對(duì)比熒光強(qiáng)度,采用NIS Elements F軟件處理圖像;
(6)WST-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活性;
(7)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋
6、亡;
(8)所有計(jì)量數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件檢測(cè)。
結(jié)果:TPE完全溶解于DMSO后在紫外光的激發(fā)下未見(jiàn)熒光,而固態(tài)顆粒可見(jiàn)TPE發(fā)出藍(lán)色熒光,持續(xù)暴露在光和空氣中后,仍可見(jiàn)強(qiáng)熒光,隨TPE濃度增加熒光強(qiáng)度增強(qiáng);TPE用于細(xì)胞染色后,紫外線激發(fā)下細(xì)胞質(zhì)呈藍(lán)色熒光,細(xì)胞核不著色,熒光強(qiáng)度與TPE濃度成正比;經(jīng)TPE處理后,腫瘤細(xì)胞系和正常細(xì)胞系的生長(zhǎng)活性均在90%以上;流式細(xì)胞儀檢測(cè)HeLa細(xì)胞和HMF
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