1、多趾是豬常見的一種遺傳缺陷，其分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)尚不清楚。對控制多趾的相關(guān)基因及其分子機(jī)制進(jìn)行研究，有利于我們深入了解多指(趾)畸形的形成機(jī)制，揭示肢體發(fā)育的過程和機(jī)理。因此，本試驗對控制豬多趾相關(guān)的基因進(jìn)行初步定位和克隆，并探討了造成豬多趾突變的原因，為闡明豬多趾產(chǎn)生的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 1豬多趾基因的初步定位選取一個三代多趾豬家系(共38頭，其中多趾10頭，正常28頭)作為研究對象，以人、鼠等動物已經(jīng)定位的多趾基因的染色體區(qū)段

2、為參考，通過比較基因組學(xué)，尋找豬的同源染色體區(qū)段并選擇微衛(wèi)星標(biāo)記，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染技術(shù)進(jìn)行基因分型，采用LINKAGE5.2軟件包進(jìn)行參數(shù)連鎖分析。 比較基因組學(xué)分析結(jié)果表明，豬的多趾相關(guān)基因位于9號染色體長臂(9q)和18號染色體上。在9q上選取6個(SW539、S0019、SW2093、SW174、SW2116、SWR1014)微衛(wèi)星標(biāo)記，在18號染色體上選取3個(SW1023、SW787、S

3、0177)微衛(wèi)星標(biāo)記，對家系中的每一個個體進(jìn)行基因分型。 分型結(jié)果顯示，微衛(wèi)星標(biāo)記SWR1014和SW1023在此家系中無多態(tài)性，均呈現(xiàn)純合子基因型，而其它標(biāo)記都顯示出了良好的多態(tài)性。 在常染色體顯性遺傳(AD)模式下，假設(shè)外顯率為100％，重組率為0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5(公母豬重組率相等)，疾病基因頻率為10-4時，9號染色體上的位點SW2116在重組率為0.2時獲得最大兩點Lod值2.10，而

4、其它位點的兩點Lod值均小于1，這說明微衛(wèi)星標(biāo)記SW2116與豬的多趾基因可能存在連鎖關(guān)系，而其它標(biāo)記與疾病基因均不連鎖。 2豬Lmbr1基因的克隆在實際生產(chǎn)中，我們發(fā)現(xiàn)豬的多趾絕大多數(shù)為軸前多趾(PPD)，但控制豬多趾基因的研究尚屬空白。Lmbr1基因是人、小鼠、雞PPD表型的候選基因，因此我們以一個多趾豬和它的一個全同胞正常個體為研究對象，根據(jù)人、小鼠和雞的Lmbr1基因序列為基礎(chǔ)，在Genebank中尋找豬的同源EST，據(jù)

5、此設(shè)計引物，采用RACE、RT-PCR技術(shù)對豬的Lmbr1基因cDNA序列進(jìn)行克隆、測序并進(jìn)行突變分析。結(jié)果如下： (1)對于正常個體，共克隆出Lmbr1基因cDNA序列1795bp，包括3'端完整序列和5'端部分序列；多趾個體克隆出3'端序列1069bp。 (2)將克隆出的正常個體的Lmbr1序列與人或鼠的C7orf2/Lmbr1相比較，CDS的5'端序列還有約330bp未克隆出，它與Genebank中發(fā)布的人C7or