1、本文利用基因工程手段通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗旱、耐鹽基因PSCS轉(zhuǎn)化到向日葵中，并成功獲得了PCR-Southern雜交檢測為陽性的轉(zhuǎn)基因植株，為向日葵的抗旱、耐鹽育種研究提供新的試驗依據(jù)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下： 1、通過PCR對載體pBIP5CS-F129A進(jìn)行特異性擴增，獲得了目的基因PSCS(1905bp)并對其進(jìn)行克隆。利用限制性核酸內(nèi)切酶BamH Ⅰ和Sal Ⅰ將目的基因從克隆重組質(zhì)粒消化下來，定向插入到植物表達(dá)載體pC

2、HF3的CaMV35S啟動子下游和NOS終止子上游，成功地構(gòu)建了PSCS基因植物表達(dá)載體pCHF3/PSCS,通過凍融法將此表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404中，提取轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，經(jīng)PCR鑒定表明P5CS基因植物表達(dá)雙元載體構(gòu)建成功。 2、以向日葵保持系75-33B和恢復(fù)系Ht80-97為轉(zhuǎn)化受體材料，用攜帶PSCS基因的雙元載體系統(tǒng)的根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行葉盤轉(zhuǎn)化，獲得抗Kan的轉(zhuǎn)基因植株。對轉(zhuǎn)化植株總DNA進(jìn)行PCR檢測，以表達(dá)載體重組質(zhì)

3、粒pCHF3/P5CS的PCR產(chǎn)物為陽性對照，以非轉(zhuǎn)基因向日葵基因組pCR產(chǎn)物為陰性對照，對轉(zhuǎn)基因向日葵基因組進(jìn)行PCR-Southern雜交檢測，證實獲得陽性轉(zhuǎn)基因植株75-33B為2株，Ht80-97為4株，轉(zhuǎn)化率分別是3.17％和4.65％。 3、試驗中對抗性芽篩選的Kan濃度設(shè)定為25mg/L，農(nóng)桿菌的侵染濃度OD<,600nm>值為0.8，通過設(shè)定三個不同侵染時間(10min、20min和30min)的處理，結(jié)果經(jīng)分析