P5CS基因的克隆及其在露地菊上的遺傳轉化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以露地菊(Dendranthema×gandiflorum)品系‘東林4號’、‘東林6號’、‘東林9號’和‘東林13號’為試驗材料,研究了不同品系在滲透脅迫下的生理活性的改變。同時,建立了‘東林4號’、‘東林6號’、‘東林9號’葉片外植體再生體系;從擬南芥中克隆了P5CS基因,應用Gateway克隆技術構建了植物表達載體,并構建了P5CS基因在露地菊上的遺傳轉化體系,主要結果如下:
  1、露地菊抗?jié)B透品系的篩選
  

2、在鹽堿脅迫條件下,‘東林4號’、‘東林9號’和‘東林13號’三個品系的耐鹽性較強,‘東林6號’的耐鹽性較差,無法適應高鹽脅迫條件。
  在低溫脅迫條件下,隨著溫度的降低,‘東林4號’、‘東林6號’、‘東林9號’、‘東林13號’4個品系都受到不同程度的低溫傷害,‘東林4號’受低溫影響最小。
  2、P5CS基因的克隆及植物表達載體的構建
  通過RT-PCR方法從擬南芥中克隆了P5CS的cDNA全長基因。利用Gatewa

3、y克隆技術構建了P5CS基因的植物表達載體。
  3、露地菊P5CS基因的遺傳轉化
  建立‘東林4號’、‘東林6號’、‘東林9號’葉片外植體再生體系,發(fā)現不同基因型葉片外植體的分化率差異顯著。‘東林9號’的葉片外植體分化率最高?!畺|林4號’最適分化培養(yǎng)基為:MS+3mg/LBA+0.1mg/L2,4-D,葉片分化率為10%;‘東林6號’最適分化培養(yǎng)基為:MS+2mg/L BA+1mg/LNAA,葉片分化率為82%;‘東林9

4、號’最適分化培養(yǎng)基為:MS+0.5mg/LBA+1.5mg/LNAA,該品系植株上層幼嫩葉片分化率為95%,中下層葉片分化率均小于50%;
  潮霉素對以葉片為外植體的分化起到很強的抑制作用,在潮霉素含量為5mg/L的培養(yǎng)基中葉片即可失去分化能力?!畺|林9號’品系組培再生芽在含有30mg/L潮霉素的培養(yǎng)基中全部死亡。
  通過農桿菌LBA4404介導,初步建立了P5CS基因轉入露地菊的遺傳轉化體系,經過PCR鑒定得到了一個陽

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