1、雙酚A(Bisphenol-A，BPA)是一種具有弱雌激素活性的環(huán)境內分泌干擾物，與雌激素受體有一定的親和力，可通過多種途徑進入人體（食品、飲料、皮膚接觸等）危害健康。BPA對腦和行為發(fā)育的影響引起廣泛關注，已有研究發(fā)現(xiàn)發(fā)育期BPA暴露可影響仔鼠成年后的焦慮和抑郁行為。由于性激素參與調控成年動物的腦結構和功能，且成年動物暴露于BPA環(huán)境的時間更長，因此推測長期BPA暴露可能會影響成年動物行為。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，長期BPA暴露不僅改變

2、成年動物的學習記憶行為，還影響海馬神經(jīng)元的突觸可塑性，突觸蛋白和NMDA受體表達。推測長期BPA暴露可能會影響成年小鼠的焦慮和抑郁行為。
　　雌激素調節(jié)焦慮和抑郁情緒與下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)軸密切相關，海馬被認為是參與調節(jié)HPA軸功能的主要組成部分，也是雌激素影響焦慮和抑郁的主要靶位。雌激素主要通過ERβ調控認知和情緒反應，選擇性ERβ受體激動劑可以減弱小鼠焦慮

3、程度，并且ERβ基因敲除的雌性小鼠表現(xiàn)出焦慮程度的增加。抑郁癥和γ-氨基丁酸(GABA)低下相關，其中GABAA-2α亞單位主要分布于海馬和杏仁核，與抑郁癥的病理生理學相關，并可調節(jié)焦慮行為。雄性GABAA-2α基因敲除小鼠表現(xiàn)出抑郁程度的加重。那么，BPA對焦慮和抑郁行為的影響是否是與ERβ、GABAA-2αR表達的變化有關呢？
　　本研究通過將成年小鼠長期暴露于BPA環(huán)境中，應用曠場、明暗穿梭箱、鏡子迷宮、高架十字迷宮等模型分

4、別觀察成年小鼠的自發(fā)活動、探究、焦慮行為，利用強迫游泳實驗模型檢測小鼠的抑郁行為，探討長期BPA暴露對成年小鼠情緒性行為的影響;檢測腦和血清里性激素水平;運用Western Blot方法檢測小鼠海馬腦區(qū)ERβ和GABAA-2α受體表達，探討長期BPA暴露對成年小鼠行為影響的分子機制。
　　研究內容:
　　通過對成年期小鼠雙酚A染毒，觀察長期雙酚A暴露對小鼠焦慮及抑郁行為的影響;長期雙酚A暴露對小鼠血清和腦里睪酮和雌二醇含量的

5、變化的影響;長期雙酚A暴露對小鼠雌激素受體-β(estrogen receptor-β，ER-β)、伽馬氨基丁酸-2α(GABAA-2α)受體相對含量的影響。
　　研究方法:
　　清潔級9周齡健康ICR小鼠，按體重隨機分為雌雄各5組。雙酚A(0.04、0.4、4、40mg/kg)從第10周開始進行灌胃染毒，對照組給予同體積的溶媒。染毒12周之后，采用放射免疫法測定腦和血液里睪酮含量和雌二醇含量的變化;依次運用曠場、明暗穿梭箱

6、、鏡子迷宮、高架十字迷宮、強迫游泳模型等行為測試儀器測試雌雄小鼠的焦慮和抑郁行為;Western blot檢測小鼠海馬腦區(qū)ERβ和GABAA-2αR蛋白表達情況，探討其可能的分子機制。
　　研究結果:
　　1.10周齡小鼠體重無統(tǒng)計學差異，暴露12周后，雌雄出現(xiàn)極顯著性別差異F(1，118)=3.509，p=0.01，雄鼠體重顯著高于雌鼠(p＜0.01); BPA暴露組與同性別對照組相比，體重沒有顯著差異。BPA暴露對雌、雄

7、小鼠生殖器官/體重沒有顯著影響。
　　2.BPA暴露對雌鼠腦和血清雌二醇含量均沒有顯著影響，但BPA暴露明顯降低腦和血清的睪酮水平，特別是0.4 mg/kg BPA組的血清睪酮含量顯著低于對照組(p＜0.05)
　　3.行為檢測結果:1）曠場行為檢測發(fā)現(xiàn)，BPA暴露12周對成年小鼠的自發(fā)活動和探究行為沒有明顯影響，但可以消除小鼠5min跑格數(shù)和中央?yún)^(qū)域停留時間的性別差異。2）明暗箱測試發(fā)現(xiàn)，BPA抑制了雄性活動性，并消除其性

8、別差異。3）鏡子迷宮行為檢測發(fā)現(xiàn)，BPA暴露可提高雌鼠的活動性.性別因素顯著影響小鼠鏡區(qū)停留時間(F(1，118)=3.965，p=0.049)，但不影響鏡區(qū)與非鏡區(qū)的穿梭次數(shù)。4)高架十字迷宮行為檢測發(fā)現(xiàn)，正常小鼠進入開放臂次數(shù)和開放臂停留時間表現(xiàn)出雄鼠高于雌鼠的性別差異(p＜0.05)，表明正常雄鼠比雌鼠表現(xiàn)出弱的焦慮樣狀態(tài)。然而，BPA暴露減少雄鼠卻增加雌鼠進入開放臂的次數(shù)和開放臂停留時間，特別是0.4～40 mg/kg/d BP

9、A暴露后，與同性別的對照組間出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.01和p＜0.05）;同時，BPA因微弱增加雄鼠而減少雌鼠封閉臂停留時間，誘導該參數(shù)的性別差異（p＜0.05）。這些結果提示長期BPA暴露可增強雄鼠卻減弱雌鼠的焦慮樣狀態(tài)，并因此消除其性別差異，甚至反向誘導出雄鼠高于雌鼠焦慮狀態(tài)的性別差異。正常小鼠開放臂和封閉臂的總進入次數(shù)表現(xiàn)出雄鼠高于雌鼠的性別差異(p＜0.05)，表明正常雄鼠比雌鼠具有更高的活動性。但是，BPA暴露顯著減少雄鼠進入

10、開放臂和封閉臂的總次數(shù)，特別是0.4和40 mg/kg/d BPA暴露組與同性別對照組間出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.05)，提示長期BPA暴露可抑制雄鼠的活動性，并因此消除其性別差異。5）強迫游泳行為檢測發(fā)現(xiàn)，BPA暴露×性別交互作用和BPA暴露因素均顯著影響小鼠在強迫游泳實驗中的靜止不動時間(F(4，110)=5.014，p=0.001;F(4，115)=3.028，p=0.021)，但性別因素沒有影響。正常小鼠強迫游泳時的靜止不動時間表

11、現(xiàn)出雌鼠高于雄鼠的性別差異(p＜0.05)，表明正常雌鼠比雄鼠具有更高的抑郁情緒;但是，0.04～40 mg/kg/d BPA暴露均顯著延長雄鼠的靜止不動時間，并因此消除其性別差異。以上結果提示，BPA暴露顯著增加雄鼠的抑郁程度。
　　4.進一步的Western blot檢測顯示，長期BPA暴露顯著下調成年雄性小鼠海馬腦區(qū)ERβ蛋白表達，促進雌性而抑制雄性小鼠海馬內GABAA-2αR表達。
　　結論:
　　長期BPA暴