1、目的:
　　本研究使用小分子干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默cofilin-1基因的表達,并觀察黃芩苷和cofilin-1沉默對人皮膚鱗癌A431細胞增殖生長和遷移能力的影響,以明確cofilin-1在皮膚鱗癌發(fā)生過程中的作用,并闡明黃芩苷抗皮膚腫瘤的作用機制。
　　方法:
　　1、細胞培養(yǎng):用10％胎牛血清的高糖培養(yǎng)基DMEM在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人皮膚鱗狀細胞癌A

2、431細胞。
　　2、藥物配制:黃芩苷中加入二甲基亞砜(DMSO),配制成濃度為40mg/ml-20℃的冰箱冷藏備用,實驗時以培養(yǎng)基稀釋為50μg/ml。
　　3、siRNA干擾:針對cofilin-1 mRNA的序列設計合成了cofilin-1特異性的siRNA,并轉染人皮膚鱗癌A431細胞,運用實時定量PCR(Real-time PCR)法來檢測cofilin-1基因沉默的效果。
　　4、檢測細胞增殖活性:用細胞增

3、殖/毒性檢測試劑盒(CCK8)法檢測A431細胞的增殖的變化情況。
　　5、檢測細胞遷移能力:用細胞劃痕試驗檢測A431細胞的遷移能力。
　　結果:
　　1.實時定量PCR結果表明,每個轉染組細胞中的cofilin-1 mRNA的相對的表達量都低于空白對照組,差異均有統(tǒng)計學的意義(P<0.05),表明cofilin-1 siRNA明顯抑制了cofilin-1表達,在后繼實驗中,我們選擇沉默效果最好的siRNA片段進行細

4、胞實驗,同時western blot檢測證實了CFL1-497-siRNA可在蛋白水平上有效抑制A431細胞中的cofilin-1的表達。
　　2.和空白對照組比較,cofilin-1 siRNA轉染于細胞24h、48h、72h之后,均出現(xiàn)細胞增殖活性明顯降低;單純加入黃芩苷孵育后,A431細胞增殖活性同樣出現(xiàn)不同程度下降;而當把黃芩苷合并cofilin-1siRNA干擾時, A431細胞增殖活性的抑制作用最顯著,這表明沉默cof

5、ilin-1基因可顯著增強黃芩苷的作用;
　　3.細胞劃痕實驗結果顯示,劃痕后繼續(xù)培養(yǎng)24h,各組間細胞間隙均有一定程度愈合,其中黃芩苷組及cofilin-1siRNA組與對照組相比,劃痕愈合程度明顯下降;而黃芩苷合并cofilin-1-siRNA干預時,細胞的遷移愈合能力則進一步下降,各組間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)
　　結論:
　　抑制cofilin-1表達及單獨黃芩苷處理可明顯降低皮膚鱗癌細胞的活性與遷移