1、目的：研究體外不同濃度莪術(shù)醇(()rcumol）抑制結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞增殖及其對(duì)VEGF（vascular endothelial growth factor，VEGF）與IGF-1R(insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R)表達(dá)的影響。探討莪術(shù)醇抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞LOVO細(xì)胞的增殖和促進(jìn)凋亡作用及其可能機(jī)制，為今后確切揭示莪術(shù)醇的作用靶點(diǎn)，提高莪術(shù)醇在臨床應(yīng)用中的科學(xué)性和有效性提供依據(jù)

2、。
　　方法：莪術(shù)醇先溶解于無水乙醇，配成母濃度4μ mol/mL。分別配制0.05、0.1、0.2、0.4μ mol/mL不同濃度莪術(shù)醇且含1％無水乙醇的培養(yǎng)基，配制含1％無水乙醇培養(yǎng)基為陰性對(duì)照組，以5-FU（0.08μ mol/mL）為陽性藥物對(duì)照組。MTT法檢測(cè)莪術(shù)醇作用24、48、72、96、120 h后LOVO細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況;Hochest33258染色熒光顯微鏡觀察莪術(shù)醇作用48 h后LOVO細(xì)胞凋亡的變化;流式細(xì)

3、胞術(shù)檢測(cè)莪術(shù)醇作用LOVO細(xì)胞48 h后細(xì)胞周期阻滯情況和凋亡率變化;RT-PCR檢測(cè)經(jīng)莪術(shù)醇處理48h后LOVO細(xì)胞VEGF mRNA與IGF-1R mRNA的表達(dá);Western Blot檢測(cè)經(jīng)莪術(shù)醇處理48h后LOVO細(xì)胞VEGF與IGF-1R蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①莪術(shù)醇有抑制結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞增殖作用，且隨濃度逐漸增加、作用時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，其抑制細(xì)胞增殖的作用也逐漸增強(qiáng)，藥物作用24、48h后，0.2μmol/mL以上藥

4、物處理組與陰性對(duì)照組相比差異性顯著(P＜0.01);藥物作用72h、96h后，0.1μmol/mL以上藥物組與陰性對(duì)照組有顯著性差異（分別為P＜0.05，P＜0.01）;藥物作用120h后，與陰性對(duì)照組相比，均有差異(P＜0.05)；②Hoechst33258染色:熒光顯微鏡下見陰性對(duì)照組的細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，細(xì)胞核呈現(xiàn)淡藍(lán)色、分布均一的熒光，而0.4μmol/mL藥物組可見凋亡細(xì)胞細(xì)胞核呈深染的強(qiáng)藍(lán)色熒光，并可見凋亡小體；③流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋

5、亡率發(fā)現(xiàn):LOVO細(xì)胞經(jīng)不同濃度的莪術(shù)醇(0.05、0.1、0.2、0.4μ mol/mL)、5-FU陽性對(duì)照組及陰性對(duì)照組作用48h后，0.2μ mol/mL以上濃度莪術(shù)醇組凋亡率與陰性對(duì)照組的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨著莪術(shù)醇濃度逐漸增加，活細(xì)胞數(shù)逐漸減少，凋亡率升高，呈濃度依賴性;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期顯示:莪術(shù)醇對(duì)細(xì)胞周期的影響是隨著藥物劑量的增加，LOVO細(xì)胞G1期比例增加，S期細(xì)胞減少，G2期變化不明顯；④

6、RT-PCR結(jié)果顯示:莪術(shù)醇可以降低LOVO細(xì)胞VEGF與IGF-1R mRNA的表達(dá)，莪術(shù)醇作用LOVO細(xì)胞48h后，提高莪術(shù)醇濃度，IGF-1R和VEGF mRNA表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；⑤Western Blot結(jié)果顯示:0.05-0.4μmol/mL莪術(shù)醇可下調(diào)結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞VEGF與IGF-1R蛋白的表達(dá)，經(jīng)莪術(shù)醇作用48h后，VEGF與IGF-1R蛋白表達(dá)含量隨莪術(shù)醇濃度增加而逐漸降低，加藥組與對(duì)照