1、背景:
　　動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是心血管系統(tǒng)疾病最主要的病因,內(nèi)皮細胞損傷、單核/巨噬細胞及血管平滑肌細胞的遷移、增殖及炎癥因子的釋放等異常變化被認為是動脈粥樣硬化發(fā)病的主要病理生理過程。研究證實:巨噬細胞通過清道夫受體吞噬化學修飾的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)成為巨噬源性泡沫細胞,是動脈粥樣硬化早期階段的關(guān)鍵啟動因素,在化學修飾的脂蛋白中,氧化低密度脂蛋

2、白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)在動脈粥樣硬化形成過程中發(fā)揮重要作用。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn),Ox-LDL主要通過刺激巨噬細胞分泌粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF),進一步活化胞內(nèi)信號分子如MAPK、PI3K、NF-kB等,誘導巨噬細胞增殖,這種現(xiàn)象參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展

3、,且可能加劇動脈粥樣硬化的病理過程。
　　兒茶酚胺(catecholamines,CA)是一種含有兒茶酚和胺基的神經(jīng)類物質(zhì),包括去甲腎上腺素、腎上腺素和多巴胺(dopamine,DA)。作為兒茶酚胺中主要的內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì),DA可以通過多巴胺受體在血管舒縮、腎臟鈉水代謝、氧化應(yīng)激等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。多巴胺受體隸屬于視紫紅質(zhì)類家族,是一種G蛋白偶聯(lián)受體,根據(jù)其結(jié)構(gòu)以及藥理學特性的不同可分為兩類,即多巴胺D1類受體和多巴胺D2類受

4、體。我們實驗室及以往的大量研究表明刺激巴胺D1類受體可抑制血小板源性生長因子、去甲腎上腺素、胰島素樣生長因子等介導的血管平滑肌細胞增殖、遷移、肥大等,對動脈粥樣硬化起到保護作用。作為參與動脈粥樣硬化過程的另一主要細胞,巨噬細胞上是否有多巴胺D1類受體的表達及多巴胺D1類受體是否對巨噬細胞亦有類似于平滑肌細胞的調(diào)節(jié)作用目前尚未見文獻報道。因此,在本課題中,我們首先觀察多巴胺D1類受體在巨噬細胞上是否有表達,進一步研究其對Ox-LDL誘導的

5、巨噬細胞的增殖是否有影響,并初步探討其潛在的作用機制。
　　方法:
　　1.小鼠腹腔巨噬細胞的提取、培養(yǎng);小鼠單核巨噬細胞株(RAW264.7)的培養(yǎng)。
　　2.采用免疫組化、RT-PCR、Western blot方法觀察多巴胺D1類受體在巨噬細胞上的表達。
　　3.采用[3H]–TdR摻入實驗、細胞計數(shù)方法觀察多巴胺D1類受體對Ox-LDL誘導的巨噬細胞增殖作用的影響。
　　4.[3H]–TdR摻入實驗及

6、Western blot方法探討多巴胺D1類受體對Ox-LDL誘導巨噬細胞增殖作用的初步的信號通路。
　　5.Western blot方法分析ApoE-/-小鼠(ApoE基因敲除的小鼠,動脈粥樣硬化斑塊模型小鼠)與C57BL/6J(ApoE基因敲除的小鼠的正常對照小鼠)腹腔巨噬細胞上多巴胺D1類受體表達的差異。
　　結(jié)果:
　　1.多巴胺D1類受體(D1和D5)在小鼠巨噬細胞上均有表達。
　　2.與正常對照小鼠相

7、比,多巴胺D1類受體在動脈粥樣硬化斑塊模型ApoE-/-小鼠腹腔巨噬細胞上的表達明顯降低。
　　3.單獨刺激多巴胺D1類受體對巨噬細胞增殖并無影響,但刺激多巴胺D1類受體可明顯抑制Ox-LDL誘導的巨噬細胞增殖,此作用呈濃度依賴性;在多巴胺D1類受體的激動劑fenoldopam、多巴胺D1類受體的拮抗劑SCH2339的共同存在下,多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam對Ox-LDL誘導巨噬細胞增殖的影響被逆轉(zhuǎn)。提示多巴胺D1類

8、受體可以明顯抑制Ox-LDL誘導的巨噬細胞增殖。
　　4.在MAPK/ERK抑制劑PD98059、PI3K/AKT抑制劑LY294002存在下,Ox-LDL對巨噬細胞增殖的影響被抑制;在不同濃度的多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam存在下,Ox-LDL引起的巨噬細胞上磷酸化的ERK、AKT、PI3K蛋白的表達降低,此作用亦呈濃度依賴性。該結(jié)果提示,多巴胺D1類受體對Ox-LDL誘導巨噬細胞增殖的影響可能通過活化了MAPK/E