1、研究背景和目的：
　　 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。在我國占全身各種惡性腫瘤的7％～10％。近年來在我國，特別是在一些大城市及沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)展較快的地區(qū)，發(fā)病率呈迅速上升趨勢，是危害婦女健康的主要疾病?；厥走^去的二十年，乳腺癌的診治取得了長足的進(jìn)展，尤其是在外科治療方面的發(fā)展取得了較好的效果。與此同時，對乳腺癌生物學(xué)行為的認(rèn)識也不斷深入，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)行了進(jìn)一步的闡述，針對乳腺癌的預(yù)后，尤其是已發(fā)生

2、侵襲轉(zhuǎn)移的晚期患者預(yù)后較差，侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制亦已成為當(dāng)今的研究熱點。眾所周知，惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是個多因素、多步驟的進(jìn)展過程，但其具體機(jī)制仍不清楚。
　　 全世界每年約有120萬婦女患上乳腺癌，占所有女性腫瘤的18％，其中超過17萬的患者是三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)，占乳腺癌患者的10％-23.8％。TNBC具有侵襲性強、復(fù)發(fā)早、進(jìn)展快、生存時間短等特殊臨床生物學(xué)行為，且對大

3、多數(shù)內(nèi)分泌治療及乳腺癌的靶向治療（針對HER-2過表達(dá)和雌孕激素受體表達(dá)陽性）不敏感，預(yù)后較其他類型乳腺癌差。傳統(tǒng)的腫瘤治療模式（手術(shù)、放療、化療）依然是目前腫瘤治療的主要手段。然而，隨著對腫瘤細(xì)胞生長、增殖、凋亡的分子機(jī)制研究的深人，伴隨著分子生物學(xué)革命性的進(jìn)展，腫瘤的治療已進(jìn)人生物治療時代，使人類靶向性治療腫瘤成為可能。靶向治療用腫瘤細(xì)胞可以表達(dá)，而正常細(xì)胞很少或不表達(dá)的特定基因或基因的表達(dá)產(chǎn)物，形成相對或絕對靶向，最大限度地殺傷腫

4、瘤細(xì)胞，而對正常細(xì)胞損傷很小的治療方法。乳腺癌分子靶向治療是指針對乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的癌基因及其相關(guān)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行治療。用于治療乳腺癌的分子靶向藥物通過阻斷腫瘤細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，來控制細(xì)胞基因表達(dá)的改變，而產(chǎn)生抑制或殺死腫瘤細(xì)胞。由于三陰乳腺癌組織學(xué)分級較差，不表達(dá)ER，PR和HER-2，且多伴有p53突變、EGFR的表達(dá)，目前較常用的分子靶向藥物不針對這個亞型，盡管該亞型對新輔助化療有較高的總反應(yīng)率和病理緩解率，但總體預(yù)后仍為

5、最差。目前尚無TNBC的治療指南，其治療一般按常規(guī)治療標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。近年來，許多研究者啟動了多個國際、多中心臨床研究，認(rèn)為三陰乳腺癌主要選擇紫杉類、鉑類、蒽環(huán)類及分子靶向治療藥物。目前尋找TNBC的新治療靶點是當(dāng)今世界研究的難點和熱點。
　　 近年有多項研究表明抑制Galectin-3表達(dá)可以影響腫瘤細(xì)胞的增殖凋亡，鮮有針對乳腺癌尤其是三陰性乳腺癌的研究。Galectin-3是一種半乳糖苷結(jié)合蛋白，屬于凝集素家族，它在細(xì)胞與細(xì)胞間及

6、細(xì)胞基質(zhì)相互作用、細(xì)胞生長、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞損傷和修復(fù)過程，腫瘤轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移等過程中扮演了一個重要角色。近年來，幾項研究證明了Galectin-3在人類腫瘤中過度表達(dá)，包括大細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌、腦部腫瘤、黑色素瘤、甲狀腺癌。Survivin是一個調(diào)亡抑制基因，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和調(diào)亡的能力，位于人類染色體17q25，有4個外顯子和3個內(nèi)含子，編碼全長1417kb。研究發(fā)現(xiàn)Survivin表達(dá)在所有常見的人類腫瘤內(nèi)

7、，從35％的胃癌患者到幾乎100％的惡性黑色素瘤患者中均可檢測到。在大多數(shù)病例中，Survivin的表達(dá)預(yù)示著較差的預(yù)后。Survivin主要表達(dá)于胚胎、發(fā)育的胎兒組織和大多數(shù)腫瘤組織內(nèi)，而不表達(dá)于成熟的正常組織。Ki-67表達(dá)在細(xì)胞周期的所有階段除了G0，它可以用來評估生物行為和增殖活性的細(xì)胞。這種過度表達(dá)的Ki-67已經(jīng)被觀察到在許多惡性腫瘤。自從1980年代早期被發(fā)現(xiàn)以來，Ki-67一直是腫瘤增殖標(biāo)志物的研究熱點，尤其在淋巴瘤、乳

8、腺癌、內(nèi)分泌和腦癌。它常作為一個補充的分級系統(tǒng)，包括提示增殖信號的有絲分裂計數(shù)。Ki-67是Oncotype評分中的五個擴(kuò)散基因之一，此外還有16個癌癥相關(guān)基因，共同檢測腫瘤復(fù)發(fā)。本課題首先從半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、生存蛋白(Survivin)、Ki-67的角度研究乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，以指導(dǎo)臨床上的診斷、分類、預(yù)后和治療。本實驗接著從RNA干擾的角度探討經(jīng)過干擾后Galectin-3與三陰性乳腺癌增殖和凋亡的關(guān)系，了

9、解Galectin-3在三陰性乳腺癌中的生物學(xué)作用，為其能否作為三陰性乳腺癌的基因診斷和治療的靶點提供依據(jù)。
　　 此外，乳腺癌5年生存率約50～60％，近50％患者治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，而晚期乳腺癌患者平均生存時間僅18～30個月。治療乳腺癌雖然有多種方案可選擇，然而預(yù)后均不理想，副作用大，且乳腺癌易乳腺外轉(zhuǎn)移，因而成為治療上最困難的腫瘤之一。傳統(tǒng)的治療方法僅能殺死腫瘤細(xì)胞中處于分裂期的細(xì)胞，一旦治療停止，腫瘤干細(xì)胞仍會繼續(xù)增殖和分

10、化，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，這就是“蒲公英”現(xiàn)象。2003年，A(l)-Hajj等在乳腺癌患者的原發(fā)病灶中進(jìn)行了分子標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)具有CD44+/CD24-/Lineage-表型的乳腺癌細(xì)胞在免疫缺陷動物模型中具有顯著的致瘤能力，其移植瘤的細(xì)胞組成與原發(fā)灶腫瘤相同，在經(jīng)過多代細(xì)胞培養(yǎng)之后，還具有較強的致瘤性，提示這類細(xì)胞具有與乳腺干細(xì)胞類似的自我更新和分化的本質(zhì)，將其稱為乳腺癌干細(xì)胞。乳腺癌干細(xì)胞(breast cancer stem cel

11、ls，BCSCs)，BCSCs被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生、發(fā)展與維持的基礎(chǔ)，與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和對治療的耐受有關(guān)。目前研究認(rèn)為只有少數(shù)BCSCs進(jìn)入細(xì)胞周期，而多數(shù)BCSCs處于靜止?fàn)顟B(tài)，故BCSCsRg常規(guī)的化療藥物并不敏感?，F(xiàn)有的物理、化學(xué)藥物治療手段所針對的是大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，對腫瘤中少數(shù)的BCSCs無法達(dá)到最有效的殺滅效果，不能防止惡性腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，而腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因?，F(xiàn)有的乳腺癌治療方法多旨在盡可能殺死或清除一切

12、腫瘤細(xì)胞，但是對存在于腫瘤中的數(shù)量稀少的干細(xì)胞樣細(xì)胞群卻作用甚微，治療后殘存腫瘤干細(xì)胞的增殖，足以促使腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。乳腺癌干細(xì)胞高表達(dá)表面標(biāo)志物CD44、ABC蛋白、MDR、ABCG2等，但是目前尚未找到特異性的靶向治療標(biāo)志物。
　　 目前，乳腺癌干細(xì)胞的靶向治療研究主要有:(1)DNA損傷修復(fù)阻斷劑，如ADP核糖聚合酶1(PARPI)阻斷劑;(2)細(xì)胞表面受體，如EGFR、C-Kit;(3)血管表皮生長因子受體vascula

13、r endothelial growth factor(VEGF) receptor抑制劑;(4)Src激酶抑制劑;(5)哺乳類動物雷帕霉素靶蛋白mammalian target ofrapamycin(roTOR);(6)白細(xì)胞介素IL;(7)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體tumornecrosis factor-related apoptosis inducing ligand(TRAIL)等。人類黑色素瘤分化相關(guān)基因-7/白介素-2

14、4(Melanoma diffrentiation-associated gene-7/interleukin-24，MDA-7/IL-24)是一個新型的、具有細(xì)胞因子樣特性的腫瘤抑制基因，是IL-10細(xì)胞因子家族的新成員。它編碼分泌型蛋白產(chǎn)物(secreted MDA-7/IL-24 protein，sMDA-7/IL-24)，與免疫系統(tǒng)的白介素功能相同，并具有抑制腫瘤生長及特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力。目前的實驗研究表明IL-24在

15、抑制和分化腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡;同時抑制腫瘤周圍血管形成;增強腫瘤細(xì)胞對放療、化療的敏感性;抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等方面具有重要作用。IL-24具有多效性、選擇性、重疊性、協(xié)同性、拮抗性和網(wǎng)絡(luò)性雙重性作用特點。但在研究中發(fā)現(xiàn)IL-24并不能完全消滅種植在裸鼠身上的腫瘤。解決這一問題的方法有二種:(1)與其他細(xì)胞因子聯(lián)合;(2)使細(xì)胞因子可以穩(wěn)定高效地表達(dá)作用在腫瘤部位。有報道指IL-24能誘導(dǎo)并增強腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體

16、(Tumor NecrosisFactor-related related apoptosis inducing ligand，TRAIL)的活性。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-Related Apoptosis Inducing Ligand，TRAIL)或稱凋亡素2配體(Apo-2 ligand，Apo2L)是由Wiley等從人心肌cDNA文庫中克隆出來的，因其氨基酸順序具有TNF超家族的

17、結(jié)構(gòu)特征并能誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞和EB病毒轉(zhuǎn)化的人類淋巴細(xì)胞凋亡而得名，因其能誘導(dǎo)不同來源的腫瘤細(xì)胞以及病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞發(fā)生凋亡，而對正常組織細(xì)胞不具有毒性，不會導(dǎo)致正常細(xì)胞發(fā)生凋亡，同時與其它抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用能協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞，所以成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點，是一種新型的抗腫瘤藥物。目前的研究認(rèn)為TRAIL主要通過位于細(xì)胞膜的死亡受體DR4和DR5通過其胞外區(qū)與TRAIL結(jié)合后活化，其胞內(nèi)死亡功能域DD傳導(dǎo)凋亡信號，活化了細(xì)胞內(nèi)的FA

18、DD-caspase途徑，激活線粒體非依賴性和線粒體依賴性二種途徑介導(dǎo)凋亡的發(fā)生。本課題最后擬重組構(gòu)建IL-24-TRAIL的基因載體，嘗試解決細(xì)胞因子在治療乳腺癌干細(xì)胞中存在的療效差、副作用大以及安全性不保障等方面的缺點，為乳腺癌干細(xì)胞的基因治療提供新的實驗和理論依據(jù)，使廣大的乳腺癌患者尤其三陰耐藥乳腺癌因本項目而受益。本項研究具有潛在的巨大社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。
　　 方法：
　　 1.Galectin-3在乳腺癌組織

19、中的表達(dá)及與Survivin、Ki-67的相關(guān)性
　　 1.1采用免疫組化SP法檢測120例乳腺癌組織，120例癌旁乳腺正常組織中Galectin-3、Survivin、Ki-67的表達(dá)。
　　 1.2比較Galectin-3、Survivin和Ki-67表達(dá)水平與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。
　　 1.3 Spearman秩檢驗分析乳腺癌中Galectin-3和Survivin表達(dá)的相關(guān)性。
　　 1.4

20、 Spearman秩檢驗分析乳腺癌中Galectin-3和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。
　　 1.5 Spearman秩檢驗分析乳腺癌中Survivin和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性。
　　 2.RNA干擾技術(shù)抑制Galectin-3表達(dá)對三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖、凋亡和侵襲的影響
　　 2.1設(shè)計并化學(xué)合成Galectin-3小干擾片段并瞬時轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231（為Galectin-3si

21、RNA組）。
　　 2.2以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為空白對照，以轉(zhuǎn)染無關(guān)siRNA為陰性對照，熒光倒置顯微鏡觀察感染效率，實時定量PCR檢測干擾結(jié)果。
　　 2.3 XTT方法觀察干擾后24，48，72和96h各組細(xì)胞增殖吸光度（A值），流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡情況。
　　 2.4劃痕實驗和Transwell實驗比較不同組間細(xì)胞遷移和侵襲情況。
　　 3.IL-24-TRAIL基因載體的構(gòu)建及其對乳腺癌干細(xì)胞遷移和

22、凋亡的影響
　　 3.1以人胎盤組織總RNA為模板，采用RT-PCR二步法，擴(kuò)增TRAIL的cDNA序列，將其克隆入pIRES載體。
　　 3.2擴(kuò)增IL-24的cDNA序列，將其克隆入pIRES-TRAIL載體，構(gòu)建其真核瞬時表達(dá)載體pIRES-IL-24-TRAIL。
　　 3.3以Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染技術(shù)，將TRAIL、IL-24基因?qū)肴橄侔└杉?xì)胞MCF-7和MDA-MB-231。

23、>　　 3.4流式細(xì)胞儀檢測兩組細(xì)胞凋亡情況。
　　 3.5劃痕實驗比較不同組間細(xì)胞遷移情況。
　　 4.統(tǒng)計分析
　　 均采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件包分析和處理實驗結(jié)果數(shù)據(jù)，采用Chi-squaretest分析Galectin-3、Survivin、Ki-67蛋白表達(dá)與臨床病理資料（包括病人年齡、性別、腫瘤分級及TNM分期）之間的聯(lián)系。用Pearson列聯(lián)系數(shù)(C)和配對資料的卡方檢驗，進(jìn)一步分析Gale

24、ctin-3、Survivin、Ki-67蛋白三者的相關(guān)性。細(xì)胞實驗數(shù)據(jù)均以(x)±s表示，多組間比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA):進(jìn)行方差齊性檢驗，各組間反應(yīng)變量為方差齊性，則組間比較采用LSD法，若方差不齊采用近似方差分析Brown-Forsythe法進(jìn)行校正，采用析因分析明確分組與時間點之間是否存在交互作用，以P＜0.05確定為差異具有顯著性，雙側(cè)檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1.Galectin-

25、3在乳腺癌組織中的表達(dá)及與Survivin、Ki-67的相關(guān)性
　　 1.1120例乳腺癌組織中Galectin-3和Ki-67在乳腺癌組織中表達(dá)高于癌旁正常組織(75.00％VS8.33％, x2=109.70, P＜0.001;62.50％VS6.67％, x2=82.68,P＜0.001），并與乳腺癌病理分級、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(x2=8.571，P=0.014;x2=4.444，P=0.035; x2=6.834，P=0

26、.033;x2=18.809，P＜0.001)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，但與年齡、腫瘤大小無顯著相關(guān)(x2=0.012，P=0.913; x2=0.212，P=0.645; x2=0.192, P=0.661; x2=0.042,P=0.837)。
　　 1.2 Survivin蛋白的陽性表達(dá)率為70.83％，顯著高于癌旁正常組織5.00％(x2=110.50，P＜0.001)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(x2=9.076，P＜0.001)

27、，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，但與年齡、腫瘤大小，腫瘤組織分級均無顯著相關(guān)性(X2=0.003，P=0.959;x2=0.156,P=0.925; x2=0.048, P=0.827)。
　　 1.3乳腺癌組織中Galectin-3、Survivin和Ki-67三者間兩兩呈正相關(guān)(x2=24.27, C=0.41,P＜0.001; x2=27.23, C=0.43,P＜0.001; x2=26.18, C=0.42,P＜0.001)。<

28、br>　　 2.RNA干擾技術(shù)抑制Galectin-3表達(dá)對三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖、凋亡和侵襲的影響
　　 2.1轉(zhuǎn)染后24 h，熒光倒置顯微鏡顯示轉(zhuǎn)染效率為80.60±5.62％，實時定量PCR提示Galectin-3siRNA轉(zhuǎn)染后相應(yīng)Galectin-3的表達(dá)顯著下降(0.077±0.003VS0.072±0.004VS0.016±0.001,F=479.7,P＜0.001)。
　　 2.2干擾

29、后24，48，72和96 h空白組和陰性對照組細(xì)胞繼續(xù)生長，Galectin-3siRNA組細(xì)胞生長抑制，數(shù)量逐漸減少（1.61±0.05、1.86±0.04、2.04±0.26、2.80±0.07VS1.60±0.07、1.77±0.10、2.01±0.37、2.49±0.15VS1.18±0.04、0.97±0.02、0.68±0.15、0.46±0.12)，干擾時間和實驗分組之間存在交互效應(yīng)(F=39.18，P＜0.001)。

30、r>　　 2.3流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，Galectin-3siRNA組比空白對照組、陰性對照組凋亡率高(36.99％±0.27％VS2.22％±0.03％VS3.84％±0.05％)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=44058.82, P＜0.001)。
　　 2.4 Transwell侵襲實驗顯示轉(zhuǎn)染Galectin-3siRNA的乳腺癌細(xì)胞浸潤穿過Matrigel膜的細(xì)胞數(shù)比空白對照組和陰性對照組的細(xì)胞數(shù)（154.70±24.01VS

31、465.00±31.76VS322.30±23.18），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=102.30，P＜0.001)。細(xì)胞劃痕實驗顯示Galectin-3siRNA組細(xì)胞遷移能力顯著低于空白對照組和陰性對照組（愈合率:48.39％±1.63％VS92.62％±2.88％VS88.49±2.25％,F=308.80,P＜0.001）。
　　 3.IL-24-TRAIL基因載體的構(gòu)建及其對乳腺癌干細(xì)胞遷移和凋亡的影響
　　 3.1克

32、隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列，成功構(gòu)建其真核表達(dá)載體。
　　 3.2流式細(xì)胞儀發(fā)現(xiàn)，MDA-MB-231細(xì)胞組結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組比空白對照組、陰性對照組凋亡壞死率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(27.91％±1.05％，68.81％±5.53％VS10.54％±1.13％,9.52％±0.95％, F=272.90, P＜0.001)。 MCF-7細(xì)胞組結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組比空白對照組、陰性對照組凋亡壞死率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（13

33、.69％±1.09％，58.71％±3.03％VS3.31％±0.22％，4.32％±0.47％，F(xiàn)=774.60，P＜0.001）。
　　 3.3分別對MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞進(jìn)行劃痕實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)48 h后空白對照組和陰性對照組細(xì)胞運動遷移基本上覆蓋了大部分劃痕區(qū)（愈合率:91.77％±2.25％、87.54％±2.93％;93.34％±2.33％、89.54％±2.15％），而轉(zhuǎn)染組劃痕區(qū)依然顯著存在（愈合率:

34、37.47％±1.53％、30.21％±1.29％;39.8％±1.22％、31.85％±1.33％），表明細(xì)胞遷移能力下調(diào)(F=716.40，P＜0.001; F=848.10，P＜0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.Galectin-3在乳腺癌組織中的表達(dá)及與Survivin、Ki-67的相關(guān)性
　　 Galectin-3、Survivin、Ki-67蛋白相互協(xié)同作用，通過抑制細(xì)胞凋亡，對乳腺癌發(fā)生和發(fā)展

35、起重要作用。
　　 2.RNA干擾技術(shù)抑制Galectin-3表達(dá)對三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖、凋亡和侵襲的影響
　　 RNA干擾能抑制Galectin-3的表達(dá)以及MDA-MB-231細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、降低其遷移侵襲能力。
　　 3.IL-24-TRAIL基因載體的構(gòu)建及其對乳腺癌干細(xì)胞遷移和凋亡的影響
　　 pIRES-IL-24-TRAIL構(gòu)建成功，并能誘導(dǎo)乳腺癌干細(xì)胞凋亡、

36、降低其遷移能力。
　　 創(chuàng)新之處
　　 1.乳腺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多個基因及各種調(diào)控因子的相互作用，是一個復(fù)雜的過程，Galectin-3、Survivin及Ki-67與乳腺癌的預(yù)后有顯著的相關(guān)性，可作為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)，有待進(jìn)一步研究探討三者具體的作用機(jī)制，為乳腺癌靶向治療提供了新的靶點。
　　 2.乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移是一個多因素、多步驟的進(jìn)展過程，本項目從臨床、分子細(xì)胞學(xué)兩方面研究乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，用RNA干

37、擾技術(shù)、免疫組化、RT-PCR、凋亡分析等技術(shù)進(jìn)行研究，很有深度和廣度，目前國內(nèi)外有許多關(guān)于Galectin-3siRNA在呼吸、消化道等腫瘤治療上的研究，但少有關(guān)于三陰性乳腺癌的研究，本課題具有重大應(yīng)用價值和理論意義。
　　 3.雖然國際上已經(jīng)開始利用重組IL-24或TRAIL治療某些惡性腫瘤的實驗研究，但是尚未有聯(lián)合在乳腺癌方面運用的報道，本研究項目擬采用pIRES作為IL-24和TRAIL基因的載體，構(gòu)建pIRES-IL-