1、目的：抗體的糖型對抗體的功能有著極其重要的影響，PNGase F和Endo F2是糖苷酶家族中的重要成員，在抗體和抗體糖型的鑒定中發(fā)揮著重要作用，但這兩種酶的酶切最適pH值差異巨大，無法在同一pH的緩沖液下進行抗體單步酶切，并且PNGase F無法切除位于抗體Fab段的糖鏈。若抗體在多個部分有糖基化修飾，那么就要兩種酶進行多步酶切，而這會對后期抗體及其糖型的檢測造成不可控的影響，如何在同一pH下使兩種酶均能發(fā)揮作用目前尚未有研究。

2、>　　方法：分別通過全基因合成得到PNGase F及Endo F2基因片段，采用大腸桿菌進行表達，純化過后得到了PNGase F及Endo F2，然后通過晶體模擬及蛋白參數(shù)的運算，決定采用融合蛋白的方式來完成Endo F2的pH shift，確定了通過串聯(lián)兩段基因進行表達的可行性，將Endo F2及PNGase F基因串聯(lián)片段克隆到pET32a+載體上，并誘導(dǎo)大腸桿菌表達獲得大量重組可溶性的糖苷酶，進而采用兩步純化，得到具有活性的高純度

3、“融合酶”。采用該酶進行抗體酶切，并通過質(zhì)譜及SDS-PAGE來進一步確定“融合酶”pH shift的有效性。
　　結(jié)果：通過串聯(lián)表達構(gòu)建的“融合酶”不但實現(xiàn)了可溶性表達，可以應(yīng)用于寬泛的pH范圍，可在同一pH緩沖液中同時發(fā)揮兩種酶的作用，并且可以在非變性的條件下有效地切除抗體中FC及Fba上的糖鏈，具有很好的脫糖基的作用。
　　結(jié)論： Endo F2和PNGase F融合表達后，形成了一種新型雙功能酶，成功地實現(xiàn)了pH s