1、近年來(lái),隨著生命科學(xué)研究的飛速進(jìn)展,惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)、血管生成以及細(xì)胞與胞外基質(zhì)的相互作用等各種基本過(guò)程正在被逐步闡明,以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物篩選靶點(diǎn),發(fā)現(xiàn)選擇性作用于特定靶點(diǎn)的高效、低毒、特異性強(qiáng)的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究開(kāi)發(fā)的重要方向。其中絲/蘇氨酸激酶Aurora B正日益成為國(guó)際上抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。
　　 絲/蘇氨酸蛋白激酶A

2、urora B在大多數(shù)惡性腫瘤中均高表達(dá),在細(xì)胞周期中的作用直接影響了基因組的穩(wěn)定,它的異常調(diào)控可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,Aurora B高表達(dá)與肝細(xì)胞癌、肺癌等腫瘤的預(yù)后也密切相關(guān)。因此,Aurora B被視為具有很好市場(chǎng)潛力的抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)的一個(gè)新靶點(diǎn),并受到極大的重視。目前已報(bào)道的Aurora B激酶抑制劑絕大部分處于臨床前研究,少數(shù)進(jìn)入臨床研究的尚處于Ⅰ/Ⅱ期階段,目前尚無(wú)有效的特異性Aurora B激酶抑制劑上市。
　　 基于

3、Aurora B激酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要作用及目前針對(duì)激酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀,本論文以絲/蘇氨酸蛋白激酶.Aurora B為分子靶點(diǎn),采用Bac-to-BacTM昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了具有激酶活性的Aurora B激酶活性蛋白,研究了激酶活性和酶濃度、底物濃度及ATP濃度的關(guān)系,確定了酶量為0.5μl/:孔、ATP濃度為20μM,底物濃度為200nM試驗(yàn)參數(shù)。最后使用Aurora B抑制劑VX680對(duì)該模型進(jìn)行了驗(yàn)證,

4、表明了該模型的可行性,可用于篩選Aurora B激酶的抑制劑。
　　 應(yīng)用建立的模型,我們對(duì)182個(gè)化合物進(jìn)行了篩選。篩選中發(fā)現(xiàn)了CGM系列5個(gè)化合物具有Aurora B激酶抑制活性,其IC50為微摩爾級(jí),其中有兩個(gè)化合物對(duì)MCF7細(xì)胞中Aurora B激酶活性具有一定的抑制作用。
　　 綜上所述,本研究建立了一個(gè)基于酶聯(lián)免疫吸附法原理(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)的穩(wěn)