1、胃癌是一種全世界常見的惡性腫瘤形式，其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一直是科學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。其中，轉(zhuǎn)錄因子的異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，研究其在腫瘤中的具體表達(dá)調(diào)控模式，可能為腫瘤治療提供新的預(yù)測指標(biāo)和干預(yù)靶點(diǎn)。
　　分化型胚胎軟骨發(fā)育基因1(differentiatedembry-ochondrocyteexpressedgene1，DEC1)又稱SHARP-2或Stra13，是由Shen等自人類軟骨細(xì)胞中分離得到的一種bHLH轉(zhuǎn)錄因子

2、，它廣泛表達(dá)于大多數(shù)正常組織，并調(diào)節(jié)著機(jī)體正常的生理節(jié)律、自身免疫以及免疫細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。近年來研究發(fā)現(xiàn)DEC1在多種腫瘤存在高表達(dá)，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)能在缺氧的情況下誘導(dǎo)一系列缺氧反應(yīng)基因的表達(dá)，與腫瘤生長轉(zhuǎn)移及增殖凋亡密切相關(guān)。多種細(xì)胞外刺激可以引起機(jī)體DEC1表達(dá)的變化，其中研究最多的是DEC1與腫瘤組織的低氧狀態(tài)的相關(guān)性。已有研究證實(shí)在多種細(xì)胞系中DEC1可被缺氧誘導(dǎo)表達(dá)，如肺腺癌，

3、腎細(xì)胞癌以及膀胱癌，這些都提示DEC1和HIF-1α可能共同導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。ZhengY等研究證實(shí)DEC1在胃癌細(xì)胞株中存在高表達(dá)，但在胃癌細(xì)胞系中，缺氧狀態(tài)下DEC1的表達(dá)變化及其對細(xì)胞增殖凋亡的影響尚不清楚，這是本文章研究的關(guān)鍵問題。
　　目的
　　1.檢測常氧及缺氧狀態(tài)下人胃癌細(xì)胞株BGC823、HGC27中DEC1的表達(dá)變化，并分析DEC1與HIF-1α表達(dá)的相關(guān)性，探討缺氧對DEC1表達(dá)調(diào)節(jié)的機(jī)制。
　

4、　2.建立DEC1慢病毒超表達(dá)載體，獲得DEC1超表達(dá)穩(wěn)定的胃癌細(xì)胞株，為研究DEC1表達(dá)調(diào)控作用提供良好的細(xì)胞模型;
　　3.探討DEC1對缺氧所致的胃癌細(xì)胞增殖凋亡的影響，為明確其是否可作為胃癌治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法
　　1.復(fù)蘇，培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株BGC823和HGC27，于對數(shù)生長期傳代并分組，對照組常氧培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組缺氧處理。
　　2.采用RT-PCR，WesternBlot及細(xì)胞免疫熒光法分別

5、檢測各組胃癌細(xì)胞株BGC823和HGC27各組中HIF-1α和DEC1mRNA及蛋白表達(dá)情況，并進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　3.構(gòu)建超表達(dá)DEC1慢病毒載體(pGV-DEC1)和陰性對照載體(pGV);在293T細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝和滴度測定;慢病毒載體感染胃癌細(xì)胞株HGC27，篩選獲得穩(wěn)定感染細(xì)胞株;WesternBlotting驗(yàn)證慢病毒載體的有效性。
　　4.將上述獲得的穩(wěn)定感染的兩組細(xì)胞株分為超表達(dá)組(pGV-DEC1)和空

6、載組(pGV)，超表達(dá)組又分為常氧組(pGV-DEC1-N)和缺氧組(pGV-DEC1-H)，同時(shí)空載組也分為常氧組(pGV-N)和缺氧組(pGV-H)。采用CCK-8的方法檢測各組細(xì)胞的增殖情況;采用AnnexinⅤ-PE/7-AAD雙染色法檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果
　　1.RT-PCR，WesternBlotting及細(xì)胞免疫熒光法結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組HIF-1α和DEC1mRNA及蛋白表達(dá)明顯

7、高于對照組(p＜0.05)，且細(xì)胞免疫熒光法顯示HIF-1α和DEC1的表達(dá)具有顯著相關(guān)性(p＜0.05)。
　　2.WesternBlotting結(jié)果顯示，超表達(dá)組出現(xiàn)超表達(dá)條帶（DEC1與GFP的融合蛋白），而空載組只有GFP條帶。
　　3.CCK-8結(jié)果顯示，24h時(shí)，缺氧可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，但隨著缺氧時(shí)間的延長，細(xì)胞的增殖率下降（*P＜0.05）;超表達(dá)DEC1可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，且隨著時(shí)間的延長細(xì)胞增殖更明顯（*P＜0

8、.05）;pGV-H組與pGV-DEC1-H組相比，pGV-DEC1-H組的細(xì)胞增殖率更高，說明DEC1可以抗細(xì)胞缺氧所致的增殖抑制（*P＜0.05）。
　　4.AnnexinⅤ-PE/7-AAD雙染色法結(jié)果顯示，兩常氧組相比，超表達(dá)組(pGV-DEC1-N)的凋亡率低于空載組(pGV-N)(p＜0.05);兩空載組相比，缺氧組(pGV-H)的凋亡率高于常氧組(pGV-N)(p＜0.05);兩缺氧組相比，超表達(dá)組(pGV-DEC1