1、口腔扁平苔蘚(oral lichen planus,OLP)是一種常見的口腔黏膜病，其在口腔黏膜病中的發(fā)病率僅次于復(fù)發(fā)性口腔潰瘍（recurrent aphthous ulcer,RAU）。該疾病常常遷延不愈，給病人造成巨大痛苦。由于口腔扁平苔蘚病因不明，因此治療以對癥為主，經(jīng)常使用免疫抑制劑，如糖皮質(zhì)激素等。移植物抗宿主?。℅raft-vs-host disease,GVHD)是同種異體骨髓移植（bone marrow transpl

2、antation,BMT)的一種常見的嚴(yán)重的并發(fā)癥。口腔黏膜內(nèi)的GVHD無論在臨床還是組織學(xué)上與OLP都非常相似。雖然兩者可能具有不同的抗原特異性，但是它們可能具有類似的免疫致病機(jī)理，同樣的引起T淋巴細(xì)胞的密集浸潤，基底細(xì)胞凋亡，上皮基底膜的破壞。因此通常認(rèn)為關(guān)于其中一種疾病的病理生理學(xué)研究結(jié)果也能夠給另一種疾病以提示。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSC)屬于成體干細(xì)胞，廣泛分布于人體各個(gè)組織，不同組織來

3、源的MSC具有異質(zhì)性。MSC與胚胎干細(xì)胞相比避免了倫理學(xué)上的爭議，并且由于其低免疫原型，異體移植常不引起明顯的排斥反應(yīng)，因此有著廣闊的應(yīng)用前景。人們在MSC研究的初期主要寄希望于其在組織工程以及再生醫(yī)學(xué)等方面的應(yīng)用，但實(shí)際上MSC第一次應(yīng)用于臨床是利用其免疫調(diào)節(jié)能力治療GVHD，取得了較好的效果。MSC的免疫調(diào)節(jié)能力遂成為MSC研究的另一個(gè)熱點(diǎn)。產(chǎn)生了眾多的關(guān)于MSC治療免疫相關(guān)疾病的基礎(chǔ)和臨床實(shí)驗(yàn)研究。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、移

4、植物排斥以及自身免疫性心肌炎等的臨床前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中，MSC都展示出了良好的治療效果。同時(shí)由于MSC具有免疫調(diào)節(jié)能力，其與機(jī)體的整體免疫平衡有關(guān)，其功能的異?？赡芘cOLP發(fā)病有關(guān)。
　　由于GVHD與OLP之間存在密切的聯(lián)系，我們猜測MSC同樣也可能用于治療OLP，并且口腔黏膜來源的MSC可能更具安全性。但是關(guān)于口腔黏膜是否存在MSC以及其生物學(xué)特性鮮見報(bào)道。MSC與OLP的發(fā)病是否相關(guān)也未見報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)分為兩部分：<

5、br>　　1．口腔黏膜內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定
　　目的：證明口腔黏膜內(nèi)存在MSC，并且對其進(jìn)行分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性的研究。
　　方法：利用大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用標(biāo)記滯留細(xì)胞(label retaining cells,LRC)技術(shù)，利用BrdU為標(biāo)記物，檢測大鼠口腔黏膜內(nèi)可能存在的間充質(zhì)干細(xì)胞；利用細(xì)胞貼壁法，分離培養(yǎng)人體正常口腔黏膜組織內(nèi)的MSC，應(yīng)用波形絲蛋白抗體（vimentin）、stro-1單克隆抗體、CD146(Me

6、l-CAM)多克隆抗體、Oct3/4單克隆抗體、CD45單克隆抗體、Nestin單克隆抗體等檢測所分離細(xì)胞的表面抗原表達(dá)。在體外條件下利用成脂和成骨誘導(dǎo)方法，研究所分離細(xì)胞的多向分化能力。
　　結(jié)果：口腔黏膜內(nèi)存在標(biāo)記滯留細(xì)胞，利用細(xì)胞貼壁法能夠從口腔黏膜中分離出一類細(xì)胞，抗原表達(dá)符合MSC的特征，例如Stro-1（+），CD146（+），CD45(-),同時(shí)我們分離出的細(xì)胞還表達(dá)Nestin。在成骨和成脂的誘導(dǎo)下，我們所分離的細(xì)

7、胞具備向成骨細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞分化的能力。
　　結(jié)論：口腔黏膜內(nèi)存在間充質(zhì)干細(xì)胞，并且可以通過傳統(tǒng)的細(xì)胞貼壁法進(jìn)行分離及體外培養(yǎng)。同時(shí)口腔黏膜內(nèi)的MSC與真皮中的MSC類似，可能具有向神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞分化的潛力。
　　2．MSC在OLP病變組織中的變化
　　目的：研究OLP組織內(nèi)MSC的變化。
　　方法：利用MSC的相對特異性標(biāo)志Stro-1，CD146，Oct4等抗體檢測OLP與正常組織內(nèi)以上標(biāo)志的表達(dá)改變。

8、　　結(jié)果：Stro-1在正常組織以及OLP病變組織中均有表達(dá)，在正常組織中散在分布，集中于小血管周圍。陽性細(xì)胞呈圓環(huán)狀排列，符合血管周細(xì)胞的排列方式。Stro-1在OLP病變組織中主要集中于上皮基底膜下區(qū)，并且陽性表現(xiàn)強(qiáng)于正常組織。CD146在正常組織及OLP病變組織中都有表達(dá)。在正常組織中散在分布，而在OLP病變組織中主要分布于黏膜下層，固有層很少見陽性細(xì)胞，幾乎全部為密集的淋巴細(xì)胞浸潤所占據(jù)。陽性區(qū)域的整體分布較為彌散。但是在個(gè)別上