1、由Ralstonia solanacearum E.F.Smith引起的青枯病是我國及一些東南亞國家花生生產(chǎn)的重要限制因子，也是世界范圍內(nèi)花生最重要的細菌性病害。作為一種土傳病害，花生青枯病難于以化學(xué)方法防治，其他防治方法(如栽培、輪作、生物防治等)效果也非常有限，應(yīng)用花生品種的抗性是國內(nèi)外最為經(jīng)濟可行的防治途徑。20世紀(jì)80年代以來，我國花生青枯病的重要疫區(qū)(主要在長江流域和南方地區(qū))基本普及了抗病品種的種植，顯著降低了由于青枯病造成

2、的直接經(jīng)濟損失。但是，目前推廣的抗青枯病花生品種的產(chǎn)量水平普遍低于具有相同生態(tài)適應(yīng)性的非抗病品種20％以上，多數(shù)品種也存在青枯菌潛伏侵染的危害，而且抗病品種的品質(zhì)普遍較差，尤其是含油量和油酸含量偏低。由于這些品種缺陷的影響，青枯病區(qū)仍然是我國花生生產(chǎn)中產(chǎn)量和效益較低的地區(qū)。現(xiàn)有抗病品種的缺陷在很大程度上是因為過去育種中抗源親本較為單一，遺傳基礎(chǔ)狹窄，抗性評價的條件要求較高，抗性表現(xiàn)受環(huán)境影響較大，這些因素在很大程度上影響了育種進展。針對

3、這些問題，研究花生青枯病抗性種質(zhì)的遺傳多樣性，發(fā)掘優(yōu)良抗源種質(zhì)，建立抗性的分子標(biāo)記，對于深化花生乃至其它作物的青枯病抗性育種具有重要的理論和實用意義。 本研究以栽培種花生2個亞種4個植物學(xué)類型(變種)的31份對青枯病具有不同抗性的種質(zhì)為材料，通過簡單序列重復(fù)(SSR)和擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)技術(shù)分析了其DNA多樣性，并與通過形態(tài)和種子品質(zhì)性狀揭示的表型多樣性進行了比較。結(jié)果表明，不同類型抗青枯病花生種質(zhì)之間除存在豐富的表

4、型多樣性外，也存在相對豐富的DNA多樣性。所涉及花生種質(zhì)基于SSR和AFLP多態(tài)性的聚類分析結(jié)果基本一致，密枝亞種的龍生型和普通型種質(zhì)聚為一組，疏枝亞種的珍珠豆型和多粒型聚為另一組，疏枝亞種組的遺傳分化相對大于密枝亞種組。結(jié)合花生的植物學(xué)類型、地理來源和部分人工改良品種的親緣系譜分析，發(fā)現(xiàn)SSR的聚類結(jié)果與表型性狀的聚類結(jié)果更為吻合，與栽培種花生的植物學(xué)分類系統(tǒng)、地理來源和親緣系譜一致；而AFLP的聚類結(jié)果與植物學(xué)分類系統(tǒng)、地理來源和親

5、緣系譜存在微小差異，有4個含有密枝亞種親緣但在分類上屬于疏枝亞種的人工育成品種被AFLP方法聚類到密枝亞種組中，說明AFLP技術(shù)在檢測花生不同亞種間基因組滲透中具有良好作用。感病的高產(chǎn)高油種質(zhì)中花5號與密枝亞種的普通型及龍生型抗病種質(zhì)之間的遺傳距離較大，但與抗性育種中已被廣泛利用的密枝亞種抗源種質(zhì)協(xié)抗青、臺山三粒肉等差異相對較小。 用抗青枯病花生品種遠雜9102與感病品種中花5號和Chico雜交，從F<,2>代起用單粒傳法構(gòu)建了

6、花生重組近交系群體(RILs)2個，在F<,6>代按株行混合收獲，并在F<,6>和F<,7>代重復(fù)進行抗性鑒定。應(yīng)用AFLP技術(shù)和BSA分析方法，通過224對AFLP引物組合對親本中花5號和遠雜9102的鑒定，篩選出45對能顯示兩個親本差異的引物，進一步擴增由群體中極端抗病和感病個體組成的抗池和感池基因組DNA，篩選出2對能顯示抗池和感池差異的引物，并以此鑒定中花5號與遠雜9102雜交構(gòu)建的重組近交系F<,6>群體，獲得了與青枯病抗性基

7、因連鎖的兩個AFLP標(biāo)記“P3M59-500”和“P1M58-500“。根據(jù)群體抗性鑒定結(jié)果，結(jié)合AFLP分析數(shù)據(jù)并經(jīng)兩點測驗，表明這兩個標(biāo)記與抗性基因間的交換值分別為8.13％和13.01％。換算后，兩個標(biāo)記與抗性基因間的遺傳距離分別為8.73cM和13.93cM。 應(yīng)用SSR技術(shù)和354對引物鑒定親本遠雜9102與Chico間的差異，獲得能檢測雙親多態(tài)性的引物45對，并以此擴增遠雜9102與Chico雜交構(gòu)建的重組近交系F6

8、群體基因組DNA，結(jié)合重組近交系群體F<,6>和F<,7>的青枯病抗性鑒定結(jié)果，應(yīng)用相關(guān)軟件統(tǒng)計分析，繪制了栽培種花生部分遺傳連鎖圖，圖譜總長度為603.9cM，含29個標(biāo)記(28個SSR標(biāo)記和1個形態(tài)標(biāo)記)共8個連鎖群，另有17個獨立的SSR標(biāo)記未進入任何連鎖群。獲得了與青枯病抗性相關(guān)的SSR標(biāo)記2個(7G02和PMl37)，位于該圖譜的第l連鎖群(G1)上，與青枯病抗性基因間的遺傳距離分別為10.9cM和13.8cM。上述抗青枯病的