交聯(lián)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶聚集體的制備及應(yīng)用.pdf_第1頁
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1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)在血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起著重要的作用。ACE能催化水解血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ,并能使血管活性多肽緩激肽失活,從而導(dǎo)致血壓升高。
   游離ACE純化制備過程復(fù)雜且穩(wěn)定性差、難以回收、重復(fù)利用性差,商品化ACE價(jià)格昂貴。因此,在實(shí)際應(yīng)用中常將其固定化于適宜的載體上制備出固定化ACE,以提高ACE的穩(wěn)定性及重復(fù)利用性。但載體的存在會(huì)“稀釋酶活”,

2、因此有必要發(fā)展一種無載體固定化ACE的方法。
   抑制ACE的活性可以降低血壓。目前,治療高血壓的藥物主要是合成的ACE抑制劑(ACEI)。但合成ACEI副作用大,因此,研究者們將目光鎖定低毒副作用的中藥,希望能發(fā)現(xiàn)潛在的ACEI。但中藥成分過于復(fù)雜,建立高通量篩選中藥中ACEI的方法是發(fā)現(xiàn)新型降壓藥物的重、難點(diǎn)。
   本文就ACE的無載體固定化,固定化后ACE的活性調(diào)節(jié)及在中藥中篩選ACEI的應(yīng)用等方面做了以下的研

3、究:
   (1)制備了交聯(lián)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶聚集體(ACE-CLEAs),比較了ACE-CLEAs及游離ACE的酶學(xué)性質(zhì),包括最適酶促反應(yīng)溫度、最適pH、Km、Vmax、溫度穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性等。以酶活力回收率為參考,確定了制備ACE-CLEAs的最佳條件為:飽和度為80%的(NH4)2SO4溶液作為沉淀劑、沉淀時(shí)間0.5 h、質(zhì)量比為0.02%的戊二醛作為交聯(lián)劑、交聯(lián)時(shí)間1h。通過比較酶學(xué)性質(zhì)發(fā)現(xiàn),ACE-CLEAs比游離AC

4、E具有更好的溫度穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性,且與游離ACE接近的Km值表明ACE-CLEAs對(duì)底物的親和力與游離酶幾乎相當(dāng)
   (2)對(duì)ACE-CLEAs的制備條件進(jìn)行了改變,分別考察了在聚集過程中加入牛血清蛋白(BSA)作為氨基保護(hù)劑,在交聯(lián)時(shí)改用京尼平作為交聯(lián)劑,在聚集體制備完成后用甲胺進(jìn)行“后處理”,在酶活測(cè)定過程中考察一價(jià)陰離子的影響。結(jié)果均表明ACE-CLEAs中殘余醛基量很少,對(duì)酶活影響較小。
   (3)測(cè)定了1

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