1、研究背景:淀粉樣蛋白通過錯誤折疊聚集成為淀粉樣纖維,并在人體內(nèi)多種組織和器官中沉積。目前在多種疾病的患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了淀粉樣沉積,這些疾病被稱之為淀粉樣疾病,包括阿爾茲海默病、帕金森病和2型糖尿病等,在2型糖尿病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了人胰島淀粉樣多肽(hIAPP)的淀粉樣沉積。研究發(fā)現(xiàn)淀粉樣蛋白在聚集過程多伴隨細(xì)胞毒性,這種細(xì)胞毒性是造成淀粉樣疾病的主要原因之一。近年來對淀粉樣蛋白抑制劑的研究已成為研究熱點之一,許多小分子化合物已被發(fā)現(xiàn)對淀粉樣蛋白

2、的聚集具有顯著抑制作用。例如,我們前期研究已證明咖啡中的三種活性成分能有效抑制胰島淀粉樣多肽的聚集。研究表明,淀粉樣蛋白的聚集受到多種體內(nèi)外因素的影響,其中包括糖類、和氨基酸等物質(zhì)。實驗?zāi)康?研究水飛薊賓對人胰島淀粉樣多肽聚集的抑制作用和細(xì)胞保護(hù)作用。并選用人溶菌酶這一典型淀粉樣蛋白為模型,探討來源于咖啡的多酚類提取物(咖啡因、咖啡酸和綠原酸)在不同緩沖液中(甘氨酸緩沖液和PBS緩沖液)對人溶菌酶聚集的影響。實驗方法:采用未修飾蛋白光催

3、化交聯(lián)反應(yīng)檢測水飛薊賓抑制人胰島淀粉樣多肽形成多聚物,通過MTT法檢測水飛薊賓抑制人胰島淀粉樣多肽誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。利用硫磺素T熒光光譜法和斑點雜交實驗來檢測人溶菌酶的聚集強度,利用透射電鏡觀察人溶菌酶聚集物形態(tài),采用圓二色光譜法檢測人溶菌酶聚集過程中的二級結(jié)構(gòu)變化。實驗結(jié)果:水飛薊賓對hIAPP的聚集有濃度依賴性的抑制作用,可以通過抑制hIAPP聚集誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性,提高細(xì)胞存活率?？Х纫颉⒖Х人岷途G原酸在PBS緩沖液條件下對人溶菌酶