1、腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus，AAV)是基因治療的良好載體，特別是人AAV載體，因能將目的基因定點整合至人19號染色體的AAVSl部位所以格外引起人們的興趣。禽腺聯(lián)病毒(avian adeno-associated virus，AAAV)與人AAV具有類似的潛伏感染特性和基因組結(jié)構(gòu)，提示具有定點整合外源基因的可能。為了探索AAAV的反向末端重復序列(ITR)和Rep基因序列能否促進外源基因的整合和表達，本研究

2、將人溶菌酶(hLYZ)雞輸卵管特異表達盒克隆在AAAV的兩個ITR之間，并將CMV啟動子控制的Rep基因表達盒克隆入相同載體，獲得重組表達載體pRep2ITR-OV4-IYZ。以不含AAAV基因序列的雞輸卵管表達載體pOV4-LYZ為對照，經(jīng)翅靜脈注射產(chǎn)蛋雞，注射劑量均為10<'14>拷貝，隔天重復注射一次。載體注射雞蛋清中的重組酶活性檢測結(jié)果顯示，重組載體pRep2ITR-OV4-LYZ表達的hLYZ水平和表達維持時間優(yōu)于pOV4-L

3、YZ。用重組載體pRep2ITR-OV4-LYZ連續(xù)3次注射產(chǎn)蛋雞，結(jié)果顯示連續(xù)3次載體注射的重組酶表達量和時間略優(yōu)于連續(xù)兩次注射。這些試驗結(jié)果提示，上述AAAV基因序列對重組載體的細胞轉(zhuǎn)染或外源基因整合具有一定的促進作用，但不足以顯著延長外源基因的表達。 為了探索用雞輸卵管表達的重組人溶菌酶防治魚細菌性疾病的可行性，用直接結(jié)晶法提純雞蛋清中的溶菌酶，經(jīng)SDS-PAGE分析證明提取的溶菌酶純度較高，用純化的重組人溶菌酶進行魚類細