1、哺乳動物生物反應(yīng)器的研究已經(jīng)取得了很大成就，目前，科學(xué)家已經(jīng)建立牛、羊等生物反應(yīng)器來生產(chǎn)外源蛋白。由于禽類特殊的生殖生理模式，造成禽類生物反應(yīng)器的研究遠遠滯后，主要問題在于未能構(gòu)建在禽類體內(nèi)能有效調(diào)控外源基因表達的特異表達載體。其中上游載體的構(gòu)建首要條件，實現(xiàn)外源基因在鵪鵓輸卵管組織中的特異性表達必須有組織特性型的啟動子的參與。卵清蛋白是蛋清中含量最高的蛋白，它的5'調(diào)控成分具有組織特異性，并受到激素的誘導(dǎo)，被幾乎所有的研究者所利用。是

2、為解決以上問題，發(fā)揮禽類作為生物反應(yīng)器的優(yōu)勢，促進禽類生物技術(shù)的快速發(fā)展，本實驗以鵪鵓作為研究對象，從以下幾個方面進行研究： 1鵪鶉卵清蛋白5'側(cè)序列的克隆采用PCR技術(shù)成功地擴增、克隆了含鵪鶉卵清蛋白5'調(diào)控區(qū)的三個不同的序列OV1、OV2、ERE，序列(OV1)為鵪鶉卵清蛋白5'調(diào)控區(qū)上游序列長約1.1kb的片段；序列(OV2)為包含上游調(diào)控區(qū)以及第一內(nèi)含子、第一外顯子、第二外顯子轉(zhuǎn)錄起始部分序列，長2.8kb左右；序列ER

3、E為鵪鶉卵清蛋白調(diào)控區(qū)的雌激素反應(yīng)元件，長675bp。 2鵪鶉5'調(diào)控區(qū)啟動GFP基因表達載體的構(gòu)建使用以上三個序列與真核熒光表達載體pGFP-N2構(gòu)建了三個表達載體pGFP-OV1、pGFP-OV2、pGFP-OV-ERE，即以鵪鵓卵清蛋白5'調(diào)控區(qū)作為啟動子，替換熒光表達載體pGFP-N2上原有的CMV IE啟動子，來啟動GFP基因的表達。其中pGFP-OV1為OV1作為啟動子、pGFP-OV2為OV2作為啟動子、pGFP-

4、OV-ERE是在pGFP-OV2的基礎(chǔ)上，將雌激素反應(yīng)元件(ERE)插入到OV2上SDRE位點上構(gòu)建而成。 3三種表達載體在鵪鵓原代輸卵管上皮細胞和鵪鵓胚胎成纖維細胞上的表達為了檢測三種載體的有效性，我們培養(yǎng)了鵪鶉自身的兩種細胞：鵪鶉輸卵管上皮細胞和鵪鶉胚胎成纖維細胞作為檢測平臺，將重組后的載體轉(zhuǎn)染以上兩種細胞，結(jié)果表明三種載體在成纖維細胞上均未表達；構(gòu)建的三個表達載體在鵪鶉原代輸卵管上皮細胞上均有表達但表達效果不同，在載體轉(zhuǎn)染