1、目的：
　　1.研究人胚胎皮膚不同發(fā)育時(shí)段外泌汗腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)分化特征以及相關(guān)標(biāo)記性蛋白在外泌汗腺發(fā)生過程中表達(dá)特點(diǎn)及其與汗腺發(fā)生的內(nèi)在聯(lián)系；
　　2.探索和評估細(xì)胞外基質(zhì)在體環(huán)境下誘導(dǎo)外泌汗腺細(xì)胞三維重建的汗腺樣組織與正常成人外泌汗腺在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能上的相似性。
　　方法：
　　1.根據(jù)相關(guān)人外泌汗腺特異性蛋白在成人外泌汗腺不同部位差異性表達(dá)特點(diǎn)，將CK8、CK18、CK7、CK15設(shè)計(jì)為外泌汗腺分泌部標(biāo)記角蛋

2、白；將CK5、CK14、CK19作為外泌汗腺導(dǎo)管部標(biāo)記角蛋白；-SMA作為肌上皮細(xì)胞特異性表達(dá)蛋白。將上述目的角蛋白按CK8/CK5、CK18/CK14、CK7/CK14、CK19/CK15、CK5/SMA分組，采用免疫雙熒光化學(xué)染色方法檢測不同妊娠周期人胚胎皮膚中上述外泌汗腺特標(biāo)志蛋白表達(dá)及定位情況，并觀察汗腺形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生特點(diǎn)；
　　2.收集原代培養(yǎng)融合達(dá)70％的人外泌汗腺細(xì)胞、人成纖維細(xì)胞，按照（matrigel基質(zhì)包埋外泌汗

3、腺細(xì)胞體內(nèi)培養(yǎng)組，I型膠原纖維包埋外泌汗腺細(xì)胞體內(nèi)培養(yǎng)組，matrigel基質(zhì)包埋人成纖維細(xì)胞體內(nèi)培養(yǎng)組）分組將上述兩種細(xì)胞按適當(dāng)比例與matrigel基質(zhì)、I型膠原分別混合后移植于免疫缺陷裸鼠NuNu腹股溝皮下。將上述三組在體三維培養(yǎng)2周后膠栓取出后，常規(guī)甲醛固定后石蠟包埋、切片，采用HE染色、免疫熒光化學(xué)染色、基底膜六胺銀染色方法并與正常成人皮膚外泌汗腺在形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能蛋白、結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)方面進(jìn)行鑒別分析。
　　結(jié)果：
　

4、　1.CK14、CK15、CK5在早期的胚胎表皮基底細(xì)胞中既已存在，在發(fā)育早期隨表皮干細(xì)胞向外泌汗腺定向分化過程中持續(xù)表達(dá)，在汗腺發(fā)育中期隨汗腺結(jié)構(gòu)分化趨于成熟在汗腺導(dǎo)管部或分泌部選擇性失表達(dá)。CK7、CK19、α-SMA在汗腺形成早期不表達(dá)，在汗腺功能結(jié)構(gòu)分化趨于成熟的階段特異性選擇性表達(dá)于汗腺特定部位。CK8、CK18未在胚胎皮膚汗腺中檢測到，但正常成人外泌汗腺分泌細(xì)胞中表達(dá)。
　　2.matrigel基質(zhì)包埋外泌汗腺細(xì)胞體內(nèi)

5、培養(yǎng)組形成腺管樣結(jié)構(gòu)的組織，表達(dá)和免疫定位與成人外泌汗腺相同的基底膜，汗腺標(biāo)志蛋白（P-CK、CK5、CK7、CK14、CK19、CEA、α-SMA），緊密連接蛋白（Desmoglein-1/2、ZO-2、E-cadherin、Claudin-1），以及與汗液分泌和重吸收相關(guān)的功能蛋白（Na+-K+-ATPaseα/β、AQP5、CFTR、NKCCl、NHE1、V-ATPase、γENaC）。
　　結(jié)論：
　　1.汗腺的發(fā)生

6、與表皮干細(xì)胞在胚胎發(fā)育期定向分化密切相關(guān)。汗腺形成中期（胚胎妊娠17-22周）為汗腺形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能快速形成時(shí)期。汗腺發(fā)生過程伴隨著中間絲相關(guān)角蛋白程序性、規(guī)律性表達(dá)，相關(guān)角蛋白對汗腺組織結(jié)構(gòu)形成及功能維持具有特殊的意義。
　　2.裸鼠體內(nèi)matrigel基質(zhì)可以成功誘導(dǎo)汗腺細(xì)胞分化形成類外泌汗腺的腺管樣結(jié)構(gòu)。新生腺管樣結(jié)構(gòu)表達(dá)汗腺標(biāo)志蛋白、緊密連接蛋白、錨定蛋白、以及與汗液分泌和重吸收相關(guān)的功能蛋白，這與正常成人外泌汗腺極其相似。