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文檔簡介
1、目的:研究干擾素誘導蛋白16(interferon-inducible protein16,IFI16)對人腦血管外膜成纖維細胞(human brain vascular adventitial fibroblasts,HBVAF)增殖與遷移的影響及其可能機制,為該蛋白在血管增殖性疾病中的運用提供更多的理論依據(jù)。
方法:培養(yǎng)HBVAF細胞,設未干預組、干擾素α(interferon alpha,IFN-α)干預組(用終濃度為2
2、000kU/L~5000kU/L的IFN-α刺激細胞24h)。蛋白免疫印跡(western blotting)法分別測定各組細胞中 IFI16蛋白表達水平。在 HBVAF細胞中轉染針對IFI16基因的小分子干擾 RNA(small interference RNA,siRNA)48 h后,用終濃度為2000 kU/L的IFN-α干預細胞24 h。同時以與IFI16基因無關的Control siRNA作為陰性對照。實驗設空白組、Contr
3、ol siRNA組、IFI16 siRNA組、IFN-α組、IFN-α+Control siRNA組、IFN-α+IFI16 siRNA組。流式細胞儀測定細胞周期,細胞劃線法與 transwell法測定細胞遷移能力。應用real-time PCR法和western blotting法分別測定細胞中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平的變化。
結果:與未干預組比較,IFN-α(2000kU/L~5000kU/L)干
4、預 HBVAF后,IFI16蛋白表達水平明顯上調(P<0.05),但不同濃度 IFN-α組之間無統(tǒng)計學差異。然而與空白組比較,轉染針對IFI16 siRNA后,HBVAF中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平下調,增加了細胞G1/S期轉換。IFN-α可誘導HBVAF中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表達水平上調,同時抑制細胞G1/S期轉換與細胞遷移,但在轉染了IFI16 siRNA的HBVAF中IFN-α的上述作
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