1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文胰腺導(dǎo)管干細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞融合參與胰腺癌起源的實驗研究姓名：勾善淼申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：王春友20090501華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 平檢測、體外增殖能力測定、向胰島 β 細胞和胰腺腺泡細胞轉(zhuǎn)化能力測定。 全骨髓培養(yǎng)法獲取小鼠骨髓間充質(zhì)細胞， 通過流式細胞術(shù)檢測骨髓間充質(zhì)干細胞表面標(biāo)志物的表達，繪制細胞增殖曲線評

2、價細胞增殖能力，通過在成骨、成軟骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞分化。 PEG 化學(xué)誘導(dǎo) C57BL/6J- Tg(pPGKneobpA)3Ems 小鼠胰腺導(dǎo)管細胞與 GFP 轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞的融合，G418 篩選與流式分選純化融合細胞，繪制融合細胞增殖曲線檢測細胞增殖能力，軟瓊脂克隆形成實驗檢測融合細胞錨定依賴性，Transwell實驗鑒定融合細胞移動與侵襲能力；體外長期培養(yǎng)融合細胞，并以

3、骨髓間充質(zhì)干細胞和胰腺導(dǎo)管細胞為對照，光學(xué)顯微鏡下尋找并擴增惡性轉(zhuǎn)化克?。焕L制細胞增殖曲線評價惡性轉(zhuǎn)化細胞增殖能力，軟瓊脂克隆形成實驗檢測惡性轉(zhuǎn)化細胞錨定依賴性，流式細胞術(shù)分析惡性轉(zhuǎn)化細胞染色體倍數(shù)， 核型分析尋找非整倍體細胞， Transwell 實驗鑒定惡性轉(zhuǎn)化細胞的移動與侵襲能力， NOD/SCID 鼠成瘤實驗鑒定惡性轉(zhuǎn)化細胞的成瘤能力。 對比惡性轉(zhuǎn)化的融合細胞與胰腺癌干細胞的生物學(xué)特性， 探討胰腺癌干細胞的可能起源。 實驗結(jié)果

4、實驗結(jié)果 PANC- 1胰腺癌細胞中存在腫瘤干細胞亞群， 這群細胞所占比例為9.83％±2.61％。胰腺癌腫瘤干細胞中 98.10%±1.26%能排出 Hoechst 33342 染料， 裸鼠皮下成瘤實驗顯示 5×105 細胞即可形成腫瘤。此群細胞高表達 CD44、Sca- 1 和 ESA，CD34 表達水平較低，但遠高于一般胰腺癌細胞，c- met 表達水平與一般胰腺癌細胞無顯著差異。 部分胰腺導(dǎo)管細胞

5、表達 CD24，CD24 ＋細胞主要分布于小葉間胰管上皮和小葉內(nèi)胰管上皮，CD24 ＋細胞主要分布于主胰管上皮和閏管上皮。CD24- 胰腺導(dǎo)管細胞較CD24 ＋導(dǎo)管細胞具有更強的增殖能力，在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)后可經(jīng) bFGF 誘導(dǎo)分化為胰島 β 細胞。 聯(lián)合 G418 篩選與流式細胞分選 PEG 融合細胞可獲得純化的融合細胞。 胰腺導(dǎo)管細胞在與骨髓間充質(zhì)干細胞融合后部分融合細胞喪失錨定依賴性。 經(jīng)過長期體外培養(yǎng)后，融合細胞易發(fā)生染色體與