1、登革病毒（DENV）是一種蟲媒病毒，主要是通過白紋伊蚊和埃及伊蚊進行傳播，每年約有5000萬-5.28億人口受到感染。DENV感染可以引起登革熱（DF）和危及生命的登革出血熱（DHF）及登革休克綜合征(DSS)，其中DHF/DSS是重癥的登革病毒感染，其主要的特征之一是血漿滲漏。目前普遍認為DHF/DSS的發(fā)病機制主要包括病毒毒力因素，抗體依賴性感染增強效應（ADE），宿主因素，交叉反應性T細胞介導的免疫病理損傷以及細胞因子風暴等。眾多

2、發(fā)病機制的提出主要是因為模型的不同，目前小鼠、人血管內(nèi)皮細胞主要以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）作為研究DENV感染發(fā)病機制的主要模型，但小鼠模型的運用并不能完全模擬人類的感染情況，細胞模型則因作用因素單一也不能確切的反映感染癥狀。
　　近年來研究發(fā)現(xiàn)組織基底硬度是影響細胞功能的主要因素之一，正常生理條件下血管基底膜及下層基質(zhì)的彈性硬度值影響了多種與血管內(nèi)皮細胞生存、復制、遷徙和維持穩(wěn)態(tài)的重要生物學功能，不同彈性硬度條件下這些生

3、物學功能水平差異較大。當前利用聚丙烯酰胺凝膠構建不同的組織硬度可以影響細胞的生物學功能，使其能夠更貼近生理環(huán)境。本實驗通過水凝膠模擬人血管內(nèi)皮細胞基底膜彈性硬度，使體外模型的建立能夠更貼近生理環(huán)境，為 DENV發(fā)病機制的研究提供一個新的研究模型。
　　目的:利用水凝膠(hydrogel)模擬人類血管內(nèi)皮細胞基底膜彈性硬度,以登革病毒2型(DENV-2)NGC株感染接種于水凝膠為基底的原代 HUVECs,觀察HUVECs在水凝膠與普

4、通塑料培養(yǎng)瓶產(chǎn)生IL-29的情況。
　　方法:
　　1.原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定：從健康新生兒的臍帶中分離并培養(yǎng)原代HUVECs,利用免疫組織化學法和流式細胞術鑒定所分離的細胞。
　　2.水凝膠的制備和細胞接種：將原代 HUVECs接種于丙烯酰胺與聚丙烯酰胺混合配制的水凝膠。
　　3.流式細胞術檢測細胞凋亡及感染率：以MOI(multiplicity of infection)=10的DENV-2

5、NGC株感染HUVECs,利用流式細胞術檢測48h細胞的凋亡率及病毒的感染率。
　　4.基因芯片檢測：提取DENV-2感染48h的接種于水凝膠和普通塑料瓶的原代HUVECs的總mRNA，送檢樣本進行基因表達譜芯片的檢測。
　　5.實時定量PCR(qRT-PCR)及雙抗體夾心ELISA法實驗：通過實時定量PCR及雙抗體夾心ELISA法驗證基因芯片檢測相關基因的表達情況。
　　結果:DENV-2 NGC株感染培養(yǎng)于水凝膠的

6、原代 HUVECs48h,利用流式細胞術檢測證實原代 HUVECs的病毒感染率較低,細胞凋亡率與水凝膠未感染組比較,差異無統(tǒng)計學意義；通過mRNA基因表達譜芯片、實時熒光定量PCR、雙抗體夾心ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)IL-29的表達與普通塑料細胞培養(yǎng)瓶接種的原代臍靜脈內(nèi)皮細胞受到病毒感染存在差異。
　　結論:利用DENV-2 NGC株感染接種于水凝膠的臍靜脈內(nèi)皮細胞,通過 mRNA基因表達譜芯片檢測發(fā)現(xiàn)IL-29的產(chǎn)生,并且與體外正常