1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)死亡率高，預后差。SAP的發(fā)病機制十分復雜，目前認為是一種由多種炎癥介質參與，以中性粒細胞、單核巨噬細胞和內(nèi)皮細胞為效應細胞的全身性炎癥反應。SAP來勢兇猛，病程進展快，死亡率高達20％-30％。腸道是應激反應的中心器官之一，大量研究顯示SAP容易發(fā)生腸屏障功能障礙(intestine barrier functional disturbance，IBFD)，I

2、BFD是SAP并發(fā)感染、甚至形成腹腔膿腫，誘發(fā)和加重全身炎癥反應綜合征(SIRS)、多器官功能障礙綜合征(MODS)，且死亡率居高不下的癥結所在。
　　 隨著對SAP發(fā)病機理研究的深入，人們逐漸認識到SAP時出現(xiàn)的全身炎癥反應綜合征(systemic inflammation response syndrome，SIRS)及由此引起的多臟器功能衰竭(multiple organ failure，MOF)是SAP高死亡率的主要原因

3、，阻斷SIRS發(fā)生的某一環(huán)節(jié)將有助于減少MOF的發(fā)生，降低死亡率。SAP的發(fā)生與大量細胞因子級聯(lián)反應引起的全身炎癥反應綜合征(SIRS)密切相關。SIRS是造成多器官功能不全綜合征(MODS)的重要原因。越來越多的證據(jù)表明：SAP時各種炎性細胞產(chǎn)生的促炎性細胞因子是導致SIRS發(fā)生的關鍵因素，因此學者們推測采用細胞因子抗體或其它拮抗細胞因子的方法可能會減輕SAP的炎癥反應，后來的實驗雖然證實了這一結論，但是治療結果并不理想。究其原因在于

4、SAP時SIRS的發(fā)生是通過許多細胞因子構成的一個復雜的細胞因子網(wǎng)絡介導的，細胞因子的數(shù)量眾多且存在互相協(xié)同、互相誘生等多種復雜的相互作用，因此，單獨阻斷某一個或少數(shù)細胞因子的作用很有限，往往達不到治療目的。
　　 如何才能有效調(diào)控細胞因子的產(chǎn)生，阻斷SIRS和MOF的發(fā)生，對于SAP的防治研究具有重要意義。盡管現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)參與炎癥反應的細胞因子數(shù)量眾多，但細胞內(nèi)參與調(diào)控細胞因子產(chǎn)生的信號轉導通路卻并不多。如能對關鍵的信號轉導通路進

5、行有效的阻斷和調(diào)節(jié)，則可以十分有效地調(diào)控促炎細胞因子的產(chǎn)生，從而阻斷SIRS和MOF的發(fā)生或減輕其嚴重程度，進而提高治療效果。因此研究信號轉導通路在SAP發(fā)病機制中的作用具有重要意義。
　　 近10余年臨床研究顯示，早期釋放的炎癥因子如TNF-a、IL-1等均在模型建立后迅速升高至峰值，并迅速下降，而此時炎癥反應仍在繼續(xù)，并且臨床應用TNF-a、IL-1受體拮抗劑并未取得顯著效果，提示可能存在晚期炎癥介質參與病理反應。最近研究表

6、明，高遷移率族蛋白-1(high mobility group box1，HMGB1)是相對于腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1b(I L-1b)新的“晚期”炎癥因子。
　　 高遷移率族蛋白1(high mobility group box1，HM GB1)是一類廣泛存在于真核細胞內(nèi)的非組核蛋白，是一大類高度保守的蛋白質，分子量較低(30kDa)，帶電荷氨基酸含量豐富，因其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中遷移迅速而得名。HMG

7、B1是HMG家族成員之一，既往的研究表明，HMGB1可參與DNA復制、細胞分化及基因表達等多種細胞生命活動。最近有研究發(fā)現(xiàn)，細胞經(jīng)內(nèi)毒素刺激后，可將HMGB1分泌到細胞外，介導了內(nèi)毒素的致死效應。由于內(nèi)毒素攻擊后HMGB1的產(chǎn)生明顯晚于其他介質并持續(xù)時間較長，故被稱為膿毒癥的“晚期”介質。HMGB1通過兩種不同的途徑釋放至細胞外：活化的單核/巨噬細胞的主動分泌和壞死細胞的被動釋放，同時存在內(nèi)源危險信號的兩種不同釋放機制說明了HMGB1作

8、為內(nèi)源性炎癥介質的重要性。與TNF-α和I-1b等早期細胞因子相比，HMGB1出現(xiàn)較晚且持續(xù)時間更長，因而可能成為膿毒癥防治切實可行的潛在干預目標，能給膿毒癥和其他SIRS提供更廣的治療窗。
　　 丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate，EP)是一種穩(wěn)定的親脂性丙酮酸衍生物，許多研究表明他具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。我們通過牛磺膽酸鈉逆行胰膽管內(nèi)注射誘發(fā)大鼠重癥急性胰腺炎模型，觀察丙酮酸乙酯對相關炎癥因子的調(diào)節(jié)，探討丙酮酸乙酯對重

9、癥急性胰腺炎的保護作用及其機制，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 方法
　　 48只Wistar大鼠隨機分為正常對照組(n=8)和SAP組(n=40)。SAP組分別于建模后3、6、12、24、48h取材。測定血漿內(nèi)毒素(LPS)、二胺氧化酶(DAO)水平，逆轉錄.聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測腸組織高遷移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表達，western blot法檢測腸組織HMGB1水平。
　　 結果<

10、br>　　 與正常對照組相比，SAP發(fā)病后6h，大鼠血漿中LPS含量與DAO水平即上升，24h達峰值，48h仍顯著高于正常對照組(P<0.01)。
　　 正常情況下大鼠腸組織中有少量的HMGB1表達，SAP模型制成6h后，大鼠腸組織中HMGB1表達開始增高，較對照組差異顯著(P<0.01)；12h呈現(xiàn)進一步升高趨勢，24h達峰值，至48h仍維持在較高水平。
　　 結論
　　 1、SAP大鼠腸組織中HMGB1表達

11、延遲且持續(xù)增高。HMGB1作為晚期炎癥介質參與了SAP大鼠腸粘膜屏障損傷的病理生理過程。
　　 2、SAP時，腸組織內(nèi)HMGB1表達上調(diào)，腸屏障損傷加重；可通過抑制SAP時腸組織內(nèi)HMGB1表達，改善腸屏障功能。
　　 3、逆行胰膽管注射?；悄懰徕c可成功復制大鼠SAP動物模型。
　　 方法
　　 逆行胰膽管注射5％牛磺膽酸鈉制作SAP模型。雄性Wistar大鼠隨機分成3組：假手術組、SAP組和EP治療組。

12、測定血漿LPS、D-乳酸含量，半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測腸組織HMGB1 mRNA表達，Western-blot法進行HMGB1檢測。通過光學顯微鏡觀察腸組織病理變化及免疫組織化學法觀察HMGB1在腸組織中的表達。
　　 結果
　　 SAP建模后6h，大鼠血漿中LPS含量和D-乳酸含量上升，24h達峰值，48h仍顯著高于正常對照組(P<0.05)；EP治療后，大鼠血漿LPS含量和D-乳酸含量顯著降低。

13、(P<0.05)。
　　 SAP組大鼠腸組織HMGB1 mRNA表達水平在SAP后12 h明顯升高，至24 h達峰，48h仍維持在高水平。EP治療組腸組織HMGB1mRNA表達水平均明顯低于SAP組(P<0.05)。
　　 結論
　　 1、SAP時，HMGB1可介導腸粘膜通透性增加。
　　 2、丙酮酸乙酯能顯著下調(diào)血漿LPS含量和D-乳酸水平并明顯抑制HMGB1基因表達，改善腸粘膜屏障功能，對SAP腸粘膜

14、損傷有明顯保護作用。
　　 方法
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)株ECV-304分為對照組、HMGB1刺激組、丙酮酸乙酯(EP)處理組，應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清TNF-a水平變化，免疫熒光顯微鏡觀察血管內(nèi)皮細胞NF-κB活性的變化，免疫細胞化學染色法檢測RAGE表達，凝膠遷移率實驗(EMSA)檢測細胞內(nèi)NF-κBDNA結合活性的變化。
　　 結果
　　 HMGB1可

15、誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞NF-κB在短時間內(nèi)活化，促進TNF-a表達和RAGE表達上調(diào)；EP處理后可顯著降低NF-κB活性，抑制TNF-a和RAGE表達。
　　 結論
　　 1、HMGB1可能通過活化血管內(nèi)皮細胞NF-κB進而誘導TNF-a分泌，參與膿毒癥的病理生理過程。
　　 2、EP可通過拮抗HMGB1刺激血管內(nèi)皮細胞NF-κB活化從而發(fā)揮保護作用。
　　 3、HMGB1可能部分通過RAGE介導了細胞內(nèi)信