1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：406520511119南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文人剪切修復(fù)基因人剪切修復(fù)基因XPD對(duì)人對(duì)人HepG2肝癌細(xì)胞中肝癌細(xì)胞中Rb和MAD2表達(dá)的影響表達(dá)的影響TheeffectsofXPDinhumanHepG2hepatomacellsregulatingRbMAD2genes張慶燕張慶燕培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱(chēng)：羅文教授主任醫(yī)師申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：內(nèi)科學(xué)（

2、消化）論文答辯日期：2014年5月29日答辯委員會(huì)主席：何明評(píng)閱人：陳建勇劉敦菊2014年5月摘要II摘要目的目的：研究人類(lèi)剪切修復(fù)基因XPD（XerodermapigmentosumD)轉(zhuǎn)染至人HepG2肝癌細(xì)胞后Rb(Retinoblastomagene視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因)和MAD2（Mitoticarrestdeficient2有絲分裂阻滯缺陷蛋白2）基因表達(dá)的變化及對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響。方法方法：1、培

3、養(yǎng)人HepG2肝癌細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后傳代并接種于6cm培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。2、將我實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建與合成的pEGFPN2XPD重組質(zhì)粒和pEGFPN2空載質(zhì)粒，應(yīng)用Lipofectamine?2000將前兩者瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人HepG2肝癌細(xì)胞中。實(shí)驗(yàn)分為4組，分別是無(wú)轉(zhuǎn)染的HepG2肝癌細(xì)胞空白對(duì)照組（空白對(duì)照組）脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞組（脂質(zhì)體組）空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞HepG2pEGFPN2組（N2組）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞HepG2pEGFPN2

4、XPD組（XPD組）3、轉(zhuǎn)染后，提取各組RNA，用RTPCR檢測(cè)各組細(xì)胞的XPD、Rb及MAD2的mRNA表達(dá)量4、轉(zhuǎn)染后提取各組的總蛋白，通過(guò)Westernblotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中XPD、Rb及MAD2蛋白質(zhì)的表達(dá)量。5、將細(xì)胞接種于96孔板，進(jìn)行轉(zhuǎn)染后，通過(guò)MTT檢測(cè)各組細(xì)胞的增值活力。6、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組的細(xì)胞凋亡情況及細(xì)胞周期。結(jié)果結(jié)果：1、轉(zhuǎn)染至人HepG2細(xì)胞24h后，在熒光顯微鏡下觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)XPD組和N2組細(xì)胞