1、研究表明蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)對鞘翅目害蟲有較好的防治效果。為獲得對鞘翅目天?？坪οx云斑天牛(Batocera horsfields(Hope))具有高毒力的Bt菌株,我們用本室所保存的504株蘇云金芽胞桿菌對云斑天牛成蟲進行了生物測定和抗蟲機理方面的研究,結(jié)果如下:
　　 (1)高毒力菌株的篩選:通過一次初篩和兩次復(fù)篩生物測定,篩選到一株對云斑天牛成蟲有較高毒力的菌株ZQ-89。感

2、染喂養(yǎng)20天后校正死亡率達到55.33％,校正體重減少率為2.22％,產(chǎn)卵減少率為19.62％。ZQ-89不僅對天牛有較高的抗性,而且對天牛的生長量和繁殖力都有較高的抑制作用。
　　 (2)ZQ-89抗蟲機理的初步研究:從感染ZQ-89菌株死亡的天牛腸道中分離到蘇云金芽胞桿菌FZQ-89,對其菌體、芽胞及晶體蛋白的形態(tài)進行觀察,生測驗證和16SrDNA鑒定后發(fā)現(xiàn),FZQ-89與ZQ-89菌株具有極高的相似性,因此判斷FZQ-89

3、系ZQ-89感染天牛后在體內(nèi)繁殖的子代菌株,由此推測蘇云金芽胞桿菌可通過天牛取食進入其腸道而發(fā)揮抗蟲作用。
　　 (3)ZQ-89殺蟲活性成分的研究:發(fā)現(xiàn)在同等濃度下,純晶體蛋白的殺蟲活性最高。推測晶體蛋白在ZQ-89對云斑天牛成蟲的抗性作用中起到了主要作用。檢測晶體蛋白對天牛的抗性,計算出ZQ-89對天牛的致死中濃度LC50為21.961 mg/mL。
　　 (4)ZQ-89菌株抗蟲基因的克隆和序列分析:對ZQ-89所

4、產(chǎn)晶體蛋白進行肽指紋圖譜分析,發(fā)現(xiàn)其與蘇云金芽胞桿菌Cry1Ac類蛋白有較高的同源性。根據(jù)同源性蛋白設(shè)計引物,克隆到全長為3534 bp的抗性基因,命名為cry1Ac-89基因,編碼1177個氨基酸。
　　 (5)ZAC-89工程菌的構(gòu)建:將cry1Ac-89基因克隆到載體pHT304中,將其轉(zhuǎn)入無晶體突變株BMB171中,對其所產(chǎn)晶體形狀進行了觀測,發(fā)現(xiàn)與ZQ-89相似,都是菱形；SDS-PAGE檢測后發(fā)現(xiàn),ZAC-89所產(chǎn)晶