1、結直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國居癌癥發(fā)病率第五位;隨著生活水平提高和生活方式及飲食習慣的西化，我國結直腸癌的發(fā)病率和死亡率均有上升趨勢。2007年上海市惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率，結直腸癌男性排名第三位，女性排名已至第二位。結直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個多步驟、多階段、多基因參與的過程，傳統(tǒng)的遺傳學改變和表觀遺傳修飾共同參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。具有分子遺傳背景的結直腸癌約占25％，75％為散發(fā)性結直腸癌(sporadic colorecta

2、lcancer，SCRC)，其發(fā)生機制頗為復雜。目前認為染色體不穩(wěn)定(chromosomal instability，CIN)以及癌基因和抑癌基因的變異和DNA錯配修復(mismatch repair， MMR)功能缺失導致的廣泛微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatellite instability，MSI)是導致大腸癌發(fā)生的兩大主要基因途徑。MSI的檢測也具有臨床意義，MSI狀態(tài)與SCRC的預后以及腫瘤對化療藥物的敏感性相關。傳統(tǒng)的MSI

3、分子生物學檢測方法需要相應的設備和人員，費用昂貴，耗時較長。盡管MMR蛋白缺失狀況可以反映腫瘤的MSI狀態(tài)，但因為檢測指標不統(tǒng)一，其敏感性和特異性需要進一步論證，MMR蛋白缺失與SCRC預后的相關性也需要進一步證實。故本課題對上述問題分別報告如下:
　　第一部分散發(fā)性結直腸癌錯配修復蛋白的表達及其與臨床病理特征和預后的相關性研究
　　目的：在散發(fā)性結直腸癌(SCRC)中，應用免疫組織化學(immunohistochemist

4、ry，IHC)的方法評價4個錯配修復(mismatch repair，MMR)基因hMLH1、hPMS2、hMSH2和hMSH6編碼的蛋白表達情況，分析錯配修復蛋白(mismatch repairprotein，MMRP)表達情況與臨床病理學特征的相關性，并探討MMRP表達與SCRC患者預后的關系。
　　材料與方法：
　　1、收集2007年1月-2009年1月在復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院接受診治的452例SCRC患者的石蠟包埋組織

5、。
　　2、運用全自動免疫組化方法檢測癌組織中MLH1、PMS2、MSH2和MSH6的表達情況。四個MMRP中只要一個表達缺失即定義為錯配修復蛋白表達缺失(mismatch repair protein defect，MMR-D)，四個MMRP均無表達缺失定義為錯配修復蛋白表達正常(mismatch repair protein intact，MMR-I)。
　　3、收集452例SCRC患者的年齡、性別等臨床病理資料，通過住

6、院病例查詢、電話、門診隨訪獲得散發(fā)性結直腸癌患者隨訪資料，生存數(shù)據(jù)為總生存(overall survival，OS)和無病生存(disease-free survival, DFS)時間，分析MMRP表達情況與SCRC的臨床病理參數(shù)以及預后的關系。
　　結果：
　　1、IHC檢測結果:452例SCRC中，43例MMRP表達缺失(MMR-D)，缺失率為9.51％。其中，29例MLH1表達缺失，29例PMS2表達缺失，5例MSH

7、2表達缺失，11例MSH6表達缺失;MLH1、PMS2共同缺失25例，MSH2、MSH6共同缺失4例;1例四個MMRP均缺失。
　　2、MMR-D結直腸癌臨床病理特征:右半結腸癌MMRP表達缺失率顯著高于左半結腸癌和直腸癌(P＜0.05);MMR-D組腫瘤平均最大徑為6.32cm，MMR-I組腫瘤平均最大徑為4.27cm，腫瘤最大徑＞5cm者MMRP表達缺失率顯著高于腫瘤最大徑≤5cm者(P＜0.05);低分化者較多發(fā)生MMRP缺

8、失表達(P＜0.05)，而未發(fā)生遠處轉移(M0)患者較發(fā)生遠處轉移(M1)患者發(fā)生MMRP缺失表達的幾率顯著提高(P＜0.05)。MMRP表達情況與患者年齡、性別、脈管癌栓、神經(jīng)侵犯、淋巴結轉移情況以及臨床病理分期無顯著相關性。
　　3、生存分析
　　(1)452例SCRC中具有完整隨訪資料者442例，失訪10例。442例SCRC的無病生存率和總生存率分別為70.8％(313/442)、78.5％(347/442)。局部復發(fā)

9、率、遠處轉移率、病死率分別為14.5％(64/442)、25.3％(112/442)、21.5％(95/442)。
　　(2) MMR-D組43例中有1例失訪;6例術后局部復發(fā)，復發(fā)率14.3％;發(fā)生遠處轉移5例，其中3例肝轉移，1例骨轉移，1例全身廣泛轉移，轉移率11.9％;死亡3例，病死率7.1％。MMR-I組409例，有9例失訪。58例局部復發(fā)，復發(fā)率14.5％，與MMR-D組差異不具有統(tǒng)計學意義;轉移107例，轉移率26.

10、8％，死亡92例，病死率23％，顯著高于MMR-D組(P＜0.05)
　　(3)Kaplan-Meier單因素生存分析顯示MMR-D組總生存(OS)率顯著優(yōu)于MMR-I組(P＜0.05)，無病生存率也較MMR-I組高，但不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。COX比例風險模型分析顯示MMRP表達是SCRC總生存率獨立的預后因素(P＜0.05)。
　　第二部分散發(fā)性結直腸癌微衛(wèi)星狀態(tài)與錯配修復蛋白表達的對照性研究
　　目的：

11、應用多重熒光PCR(polymerase chain reaction)-毛細管電泳方法檢測SCRC的微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)狀態(tài)，將檢測結果與MMRP的IHC檢測結果進行比較分析，探討IHC檢測MMRP表達的方法篩選MSI表型SCRC患者的敏感性和特異性，以評價其臨床實際應用的可行性。
　　材料與方法：
　　1、根據(jù)第一部分中IHC檢測結果，選取43例MMR-D及101例MMR-I病例，分別收集兩組病例的腫瘤和相應的正常結直

12、腸組織，均為常規(guī)石蠟包埋組織。
　　2、分別提取腫瘤和相應的正常結直腸組織的DNA。
　　3、采用多重熒光PCR-毛細管電泳法檢測兩組病例的5個標準微衛(wèi)星位點(BAT25，BAT26，D2S123，D5S346，D17S250)的MSI狀態(tài)，以Genemapper軟件分析PCR產(chǎn)物并判斷腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài)。5個位點中至少2個位點有重復序列長度變化定義為高頻MSI(High level of microsatellite inst

13、ability，MSI-H)，只有一個位點有長度變化定義為低頻MSI(Low level of microsatelliteinstability，MSI-L)，無任何位點的變化定義為微衛(wèi)星穩(wěn)定(microsatellitestability，MSS)。
　　結果：
　　1、PCR檢測結果:受檢的144例SCRC中，41例為MSI-H，3例為MSI-L，100例為MSS。MMR-D組43例中，MSI-H37例，MSI-L1例

14、，MSS5例;MMR-I組101例中， MSI-H4例， MSI-L2例，MSS95例。
　　2、IHC檢測與PCR檢測結果對照分析:兩種方法檢測結果符合率為93.1％(134/144)，一致性檢驗結果kappa值=0.832(P＜0.05)。IHC檢測的敏感性為90.2％(37/41)，特異性為97％(97/100)。
　　3、生存分析:Kaplan-Meier單因素生存分析顯示MSI-H患者總生存(OS)率及無病生存(D

15、FS)率均顯著優(yōu)于MSS/MSI-L患者(P＜0.05)。
　　結論：
　　(1)本研究中有9.51％的SCRC發(fā)生MMRP的表達缺失，MMRP的表達缺失較常發(fā)生在右半結腸癌，低分化癌、無遠處轉移的結直腸癌以及腫塊較大的病例。
　　(2)MMRP的表達缺失和/或MSI-H患者預后較好，無病生存及總生存率均優(yōu)于MMRP陽性和/或MSS/MSI-L患者，MMRP表達狀況是SCRC總生存率獨立的預后因素。
　　(3)運