1、目的：腎間質纖維化(RIF)是各種原因導致腎組織病變的最終結果，在腎臟病的進展中有重要意義。目前認為RIF的發(fā)病主要是細胞外基質(ECM)沉積與降解失衡所致[1]。近年來隨著對腎間質纖維化發(fā)生機制的深入研究，腎上腺髓質素(adrenomedullin，ADM)和基質金屬蛋白酶(MMPS)系統(tǒng)對RIF影響的研究逐漸成為研究熱點之一。ADM是一種新的舒血管活性肽類，近期研究表明ADM具有抑制TGFβ1(transforming growth

2、 factor-β1)刺激膠原合成和分泌的作用，而TGFβ1是最關鍵的促纖維化生長因子。此外調控ECM代謝的基質金屬蛋白酶(MMPS)及基質金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)的表達與活性異常，也在RIF的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。 就中醫(yī)對慢性腎病的病機并結合腎臟病理改變而言，后期包括腎纖維化時以本虛為主，逐漸發(fā)展成瘀滯的本虛標實病理現(xiàn)象。結合久病入絡及腎臟病理改變，瘀血貫穿整個慢性腎病過程，具有普遍性[2]。紅花是常用的活血化瘀中

3、藥，在臨床廣泛使用于心腦血管疾病，在腎臟疾病中也具有很好的效果。本實驗應用中藥紅花對單側輸尿管結扎(unilateralureteral obstruction，UUO)誘導的腎間質纖維化大鼠模型進行干預性治療并以血管緊張素受體拮抗劑纈沙坦(Valsartan)為對照，旨在通過觀察紅花對實驗動物梗阻側腎臟相關調控因子-轉化生長因子β1、Ⅲ型膠原(collagenⅢ，ColⅢ)、ADM及其受體、ECM重要降解酶系.基質金屬蛋白酶(MMPS

4、)及其抑制因子(TIMPs)的影響，探討紅花對腎間質纖維化的拮抗作用及作用機理。方法：本實驗研究選用雌性SD大鼠40只，適應性飼養(yǎng)一周后，分別置代謝籠里取尿，測定尿蛋白及尿紅細胞全部陰性，隨機分為4組，假手術組(Sham group)、模型組(UUogroup)、纈沙坦組(UUOV group)、紅花組(UUOS group)，每組10只，除假手術組外，各組動物結扎左側輸尿管并在術前一天灌胃給藥，假手術組與模型組分別灌入等量的生理鹽水，

5、于實驗第21天全部殺檢，取左側。腎臟分別采用免疫組化及原位雜交方法檢測TGFβ1、ColⅢ、ADM及其受體、基質金屬蛋白酶及其抑制因子在蛋白及基因水平的表達。 結果：①ColⅢ蛋白的表達、分布及半定量分析結果：ColⅢ主要表達于腎間質，假手術組大鼠腎間質ColⅢ呈弱陽性表達，其余各組表達顯著增強，為條索狀或成片塊狀。其中，模型組與假手術組相比ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)；纈沙坦組、紅花組與模型組

6、相比，ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降(P＜0.05，P＜0.01)，提示紅花、纈沙坦均可抑制梗阻側腎組織中ColⅢ的蛋白表達，其中，紅花組優(yōu)于纈沙坦組，但無顯著性差異(P＞0.05)。②TGFβ1蛋白及其mRNA的表達、分布及半定量分析結果：假手術組實驗動物在腎小管上皮細胞及腎小球內TGFDl蛋白及mRNA的表達均為弱陽性；其余各組表達顯著增強，見于腎小管上皮細胞、間質細胞及腎小球內。其中，模型組較假手術組TGFβ1的陽

7、性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)：纈沙坦組、紅花組與模型組相比，TGFβ1的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降(P＜0.05，P＜0.01)，提示紅花、纈沙坦均可抑制梗阻側腎組織中TGFβ1的蛋白及mRNA表達。其中，紅花組優(yōu)于纈沙坦組，但均無顯著性差異(P＞0.05)。③ADM蛋白的表達、分布及半定量分析結果：假手術組大鼠在腎小管上皮細胞及腎小球內呈弱陽性表達，與假手術組比較，模型組表達顯著減弱，纈沙坦組表達較弱，

8、紅花組表達明顯增強。其中，紅花組和纈沙坦組與模型組相比ADM的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01、P＜0.05)，其中紅花組明顯優(yōu)于纈沙坦組(P＜0.01)，提示紅花較纈沙坦更能上調ADM蛋白的表達。④ADMR蛋白的表達、分布及半定量分析結果：假手術組ADMR陽性顆粒見于腎小管上皮細胞，呈強陽性表達，與假手術組相比其余各組表達較弱，紅花組與模型組相比ADMR的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.05,P＜0.0

9、1)，提示紅花可上調梗阻側腎組織中ADMR的蛋白表達。纈沙坦組與模型組相比無顯著性差異(P＞0.05)。⑤ADM mRNA的表達、分布及半定量分析結果：假手術組大鼠的ADM mRNA在腎小管上皮細胞中呈強陽性表達，模型組顯著減弱，紅花及纈沙坦可使其表達增強。紅花組和纈沙坦組與模型組相比ADM mRNA的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)，其中紅花組明顯優(yōu)于纈沙坦組(P＜0.01)，提示紅花較纈沙坦更能調控梗阻側腎組織中

10、ADM的mRNA表達。⑥MMP-1蛋白測定結果顯示在假手術組大鼠腎臟呈陽性表達，主要表達在腎小管上皮細胞內；與假手術組比較，其余各組表達顯著增強，腎小管上皮細胞內出現(xiàn)強表達，其中，模型組與假手術組相比，陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高(P＜0.01)；紅花組和纈沙坦組與假手術組相比顯著升高(P＜0.05)，但與模型組相比，MMP-1的陽性面積及積分光密度值無顯著性差異(P＞0.05)⑦TIMP-1蛋白測定結果顯示假手術組呈弱陽性表達

11、，主要表達于腎小管上皮細胞胞漿；模型組表達明顯增強，陽性面積增強近9.06倍，光密度測定增強6.14倍，統(tǒng)計學處理有顯著性差異(P＜0.01)；紅花組和纈沙坦組較假手術組明顯增強，但與模型組相比，其表達明顯減弱，統(tǒng)計學處理有顯著性差異(P＜0.05)，紅花組和纈沙坦組相比無顯著性差異。⑧MMP-1/TIMP-1比值測定：盡管在模型組和治療組之間，MMP-1無顯著性差別，均由于梗阻因素而表達增強，但這種代償性增強并不能減少細胞外基質的沉積

12、，其原因就在于TIMP-1的表達更為顯著所致，計算兩者的比值，就可以了解這一系統(tǒng)對細胞外基質降解的作用。根據測定結果，假手術組MMP-1/TIMP-1光密度為1.42，模型組為0.64，紅花組為0.87，纈沙坦組為0.88，其比值說明紅花和纈沙坦有調整MMP-1/TIMP-1的作用，而且主要是由于抑制TIMP-1來發(fā)揮作用，TIMP-1mRNA的抑制，可能是拮抗腎間質纖維化的機制之一。⑨MMP-1 mRNA采用原位雜交方式測定，結果顯示

13、假手術組大鼠腎小管上皮細胞及腎小球內MMP-1mRNA呈弱陽性表達，與假手術組比較，其余各組的表達均顯著增強(P＜0.05)。模型組與假手術組相比，表達增強，其陽性面積及積分光密度值分別高出假手術組1.73倍和1.99倍，紅花組和纈沙坦組MMP-1mRNA與假手術組相比有明顯上調，但與模型組比較，陽性面積及積分光密度值無明顯差異(P＞0.05) TIMP-1 mRNA表達顯示在大鼠腎小管上皮細胞和腎小球呈弱陽性表達，模型組陽性面積及積分

14、光密度值分別高出假手術組11.16倍和7.41倍(P＜0.01)，紅花組和纈沙坦組與模型組相比，TIMP-1 mRNA的表達被下調，測定其陽性面積與積分光密度與模型組有顯著性差別(P＜0.05)，但紅花組和纈沙坦組相比無顯著性差異。MMP-1/TIMP-1 mRNA比值顯示在假手術組為0.85，模型組為0.23，紅花組為0.34，纈沙坦組為0.37，提示在模型組存在著MMP-1與TIMP-1的失衡，這種失衡可以被紅花和纈沙坦部分糾正，尤