1、目的:應用結腸鏡下活檢組織對結直腸癌組織及配對癌旁組織進行非標記定量蛋白質(zhì)組學分析,篩選及鑒定兩組樣本之間的差異表達蛋白,為結直腸癌發(fā)病機制和腫瘤標志物的發(fā)現(xiàn)提供有益線索。
　　方法:
　　1.收集上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院結腸鏡下表現(xiàn)為結直腸癌患者的癌組織及配對癌旁組織(距癌組織遠端至少5cm)活檢樣本各6例,經(jīng)病理診斷均為結直腸腺癌。采用離心式蛋白組學反應器方法進行樣本制備后,使用納升級液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(NanoLC-

2、MS/MS)及非標記定量蛋白質(zhì)組學技術篩選及鑒定兩組之間的差異蛋白,并對其進行生物信息學分析。
　　2.從差異蛋白中選出以往未被發(fā)現(xiàn)和驗證過的PRELP、SOD3蛋白和已被驗證過的NGAL、S100A8蛋白,采用Western Blot方法進行驗證。
　　結果:
　　1.應用非標記定量技術共鑒定出2619個蛋白,在結直腸癌組織和癌旁組織中分別鑒定出2281和2266個蛋白,374個蛋白在兩組中表達水平有顯著差異(P<0

3、.05),其中181個蛋白在癌組織中表達上調(diào),193個蛋白表達下調(diào)。生物信息學分析結果顯示鑒定到的蛋白質(zhì)主要存在于細胞質(zhì)中(52.9％),參與多種生物過程,如細胞代謝和物質(zhì)轉運等。KEGG結果顯示這些蛋白參與21種信號轉導通路,其中匹配率最高的是核糖體通路及氧化磷酸化通路。
　　2. Western Blot結果顯示在結直腸癌組織中PRELP、SOD3表達下調(diào),NGAL、S100A、表達上調(diào),驗證結果與蛋白質(zhì)組學結果一致。

4、　　結論:
　　1.本實驗共鑒定出2619個蛋白,374個差異蛋白,這些蛋白覆蓋多種亞細胞部位,涉及多種生物過程和信號轉導通路,這些結果可能為今后結直腸癌發(fā)病機制的研究提供有益線索。
　　2.在結直腸癌組織中PRELP、SOD3表達下調(diào), NGAL、S100A8表達上調(diào),這些差異蛋白可能參與了結直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程,有可能成為結直腸癌的早期診斷標記物。
　　3.內(nèi)鏡下活檢結合非標記定量蛋白質(zhì)組學技術的方法可以用于結直腸