1、目的:篩選3日齡家蠅幼蟲血淋巴中的具有抗腫瘤作用的蛋白;通過體外實驗初步探討抗腫瘤蛋白對Hep-2細胞系的作用機制。
　　方法:1、家蠅幼蟲血淋巴蛋白的制備:采用針刺法提取熱誘導后的3齡家蠅幼蟲血淋巴，用固相萃取分離法，以乙腈溶液作洗脫劑，分離純化家蠅幼蟲血淋巴中的抗腫瘤蛋白組分。2、抗腫瘤活性檢測:應用不同濃度的抗腫瘤蛋白作用于人喉癌Hep-2細胞系不同作用時間后，觀察細胞形態(tài)的變化，MTT抑制率檢測，篩選抗腫瘤蛋白有效的作用時

2、間和作用濃度。3、抗腫瘤蛋白對Hep-2細胞作用機制的初步研究:1）觀察腫瘤細胞生長增殖抑制情況:選用MTT法檢測，初步分析對Hep-2細胞的抑制效果;2）檢測腫瘤細胞凋亡:選用細胞爬片的HE染色法，初步觀察有無細胞凋亡;進而提取細胞DNA進行瓊脂糖凝膠電泳分析，觀察是否出現(xiàn)階梯狀凋亡條帶出現(xiàn)，判斷對細胞DNA有無損傷作用;檢測腫瘤細胞胞膜變化:掃描電鏡觀察經(jīng)抗腫瘤蛋白作用后的Hep-2腫瘤細胞，觀測細胞膜的改變情況。以上四組實驗均設正

3、常細胞對照。
　　結(jié)果:1）細胞形態(tài)觀察結(jié)合MTT抑制率檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10％-50％萃取組分對Hep-2細胞的生長均有抑制作用，并且蛋白濃度在12.5μ g/ml、作用時間12h的抑制效果較好;同時發(fā)現(xiàn)40％和50％萃取組分的蛋白對腫瘤細胞的增值抑制較為明顯;2）細胞爬片的HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)抗腫瘤蛋白作用后，Hep-2細胞中出現(xiàn)細胞核濃縮，核質(zhì)深染成藍紫色的凋亡小體;DNA凝膠電泳結(jié)果顯示，未見DNA損傷后的階梯狀凋亡條帶;掃描

4、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，蛋白作用后的Hep-2細胞胞膜有明顯改變:細胞表面凹凸不平，有明顯的出泡狀隆起，微絨毛消失，相較于正常細胞密集的突起。
　　結(jié)論:1）證實家蠅幼蟲血淋巴中具有抑殺腫瘤細胞作用的蛋白組分，以40％和50％萃取組分對腫瘤細胞的增值抑制較為明顯;2）抗腫瘤蛋白作用Hep-2細胞的最有效作用濃度為12.5μg/mL，最有效作用時間為12h;3）家蠅幼蟲血淋巴中抗腫瘤蛋白能促進Hep-2腫瘤細胞凋亡，細胞膜形態(tài)發(fā)生明顯改變，而