1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文應(yīng)用cDNA微陣列篩選人卵巢癌順鉑耐藥的基因標(biāo)志譜姓名：曹漫明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張積仁20050516中文摘要驗(yàn)依據(jù)。主要研究內(nèi)容、方法和結(jié)果：(一)表達(dá)譜cDNA微陣列的制備。將從cDNA文庫中挑選的4000個(gè)靶基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和純化后制備成探針，然后將探針點(diǎn)樣子氨基玻片上，再經(jīng)過點(diǎn)樣后水合、紫外交聯(lián)，制備成表達(dá)譜cDNA微陣列。(二)順鉑誘導(dǎo)卵巢癌COCI細(xì)胞基因表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。化療敏

2、感的卵巢癌在多次化療后出現(xiàn)耐藥提示，獲得性耐藥的發(fā)生可能是化療過程中腫瘤細(xì)胞暴露于化療藥物后被誘導(dǎo)產(chǎn)生了耐藥亞型的結(jié)果。基于上述理論前提，我們?cè)诒静糠盅芯恐袘?yīng)用cDNA微陣列動(dòng)態(tài)觀察了短暫暴露于順鉑后CocI細(xì)胞mRNA表達(dá)的變化，尋找順鉑作用下COCl細(xì)胞差異表達(dá)的基因，為下一步確定順鉑獲得性耐藥基因表達(dá)標(biāo)志譜奠定基礎(chǔ)。具體方法為：分別取經(jīng)10ug／ml順鉑孵育5h、10h、15h的COCl細(xì)胞和對(duì)照COCl細(xì)胞，抽提總RNA，分離純

3、化為mRNA，逆轉(zhuǎn)錄Cy5ICy3標(biāo)記cDNA探針，與包含4000個(gè)人類基因的微陣列雜交，RTPCR驗(yàn)證表達(dá)差異的基因。結(jié)果表明：在順鉑短暫作用于COCl細(xì)胞的3個(gè)時(shí)段(5—1015h)中，均可誘導(dǎo)凋亡，凋亡率的增加呈時(shí)間依賴性，在順鉑作用下，細(xì)胞被阻滯于G2期；此過程中在順鉑誘導(dǎo)5h時(shí)COCl細(xì)胞即產(chǎn)生基因表達(dá)的改變，至15h，共有522個(gè)基因差異表達(dá)，發(fā)生差異表達(dá)基因的數(shù)量的增加和部分基因的表達(dá)強(qiáng)度的變化呈時(shí)間依賴性，，這些基因的功

4、能涉及DNA復(fù)N／轉(zhuǎn)錄與損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、癌基因，抑癌基因、細(xì)胞周期、細(xì)胞骨架以及細(xì)胞代謝等多方面，提示順鉑誘導(dǎo)卵巢癌COC。細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞毒反應(yīng)和獲得性耐藥的發(fā)生是一個(gè)多基因、多環(huán)節(jié)、多途徑參與的過程。(三)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞系COCl／DDP的建立及其基因表達(dá)譜分析。以順鉑為誘導(dǎo)劑，采用中等劑量(4ug／m1)、間歇作用法誘導(dǎo)5個(gè)月建立了人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞系COCl／DDP，然后以其親本細(xì)胞COCl為對(duì)照，應(yīng)用eDNA