1、研究背景與目的：終末期肝病嚴重危害人類健康，肝移植被認為是治療終末期肝病最有效的方法，但因肝源、費用及抗排斥藥物的不良反應等問題受到限制。干細胞移植治療終末期肝病作為一種新方法顯示出良好的應用前景。骨髓間充質干細胞(BMSCs)具有極強的自我復制能力和多向分化潛能，且低免疫源性，有望成為治療終末期肝病的一種新型種子細胞。目前實驗研究認為BMSCs參與受損肝組織的修復，但機制尚不明確，是否為多數研究者認為的干細胞跨胚層分化?目前國內外已有

2、研究將干細胞移植治療終末期肝病應用于臨床，獲得了一定療效，但目前移植效率的問題，如移植途徑是否影響移植效率，目前尚不清楚。因此本課題基上述兩個問題，將采用體外誘導實驗明確BMSCs是否可向肝樣細胞分化，為體內干細胞移植治療肝病終末期提供實驗依據。借助動物模型經門靜脈、外周靜脈移植BMSCs，分析其定植情況及對肝功能的影響，明確兩途徑對干細胞治療肝病療效的影響，為臨床研究提供實驗基礎。
　　 方法：(1)本研究采用密度梯度離心法和

3、貼壁細胞聯(lián)合培養(yǎng)法分離骨髓間充質干細胞，經培養(yǎng)傳代獲得純化的BMSCs。(2)將純化后的BMSCs在肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor HGF)和成纖維生長因子-4(basic fibroblast factor FGF-4)的作用下進行誘導培養(yǎng)后，免疫細胞化學檢測肝細胞表面標志物白蛋白、甲胎蛋白、角蛋白18的表達，明確BMSCs是否可分化為肝樣細胞。(3)將CCl4輪替注射大鼠四肢內側皮下，建造肝硬化大鼠

4、模型。將GFP標記后的BMSCs經外周靜脈、門靜脈移植入肝硬化模型大鼠體內，熒光顯微鏡檢測干細胞在肝內的定植情況，檢測血清肝功能及免疫組化檢測肝組織白蛋白的表達情況。
　　 結果：(1)采用密度梯度離心法和貼壁細胞聯(lián)合培養(yǎng)法分離的骨髓間充質干細胞純度高，體外培養(yǎng)增殖能力活躍。(2)大鼠骨髓間充質干細胞經HGF和FGF-4共誘導培養(yǎng)共28天，分別在14天、21天、28天免疫細胞化學檢測肝細胞標志物。隨著誘導時間延長，白蛋白及角蛋白

5、18表達陽性率逐漸增加，甲胎蛋白表達逐漸降低。未誘導組白蛋白、角蛋白、甲胎蛋白表達陰性。(3)HE及Masson染色顯示肝硬化大鼠模型建立成功。體外分離培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞，經攜帶綠色熒光蛋白的慢病毒轉染后在熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白的表達。經門靜脈及外周靜脈移植BMSCs28天后，兩移植組大鼠肝臟組織切片均可見散在的綠色熒光蛋白陽性細胞，表明BMSCs移植后能定植于肝硬化大鼠模型體內。實驗組各肝功能指標ALB、ALT、AST均隨時

6、間變化逐漸好轉，門靜脈實驗組與其對照組比較各肝功能指標差異均有統(tǒng)計學意義，尾靜脈實驗組與其對照組比較各肝功能指標差異均有統(tǒng)計學意義，兩實驗組之間比較各肝功能指標差異均無統(tǒng)計學意義。免疫組化檢測肝組織白蛋白表達，門靜脈實驗組與其對照組比較差異有統(tǒng)計學意義，尾靜脈實驗組和對照組比較差異有統(tǒng)計學意義，兩實驗組之間比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1．骨髓間充質干細胞在體外可分化成為肝樣細胞；
　　 2．經尾靜