1、目的：通過探討利用腺病毒（Adenovirus，Ad）提高腺相關(guān)病毒（Adeno-associated Virus，AAV）對(duì)大腦皮層神經(jīng)元轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的可行性、建立一種新的觀察腫瘤細(xì)胞生長和遷移的膠質(zhì)瘤（Glioma）原位移植動(dòng)物模型及運(yùn)用血管內(nèi)皮抑素（Endostatin）基因轉(zhuǎn)染的方法觀察膠質(zhì)瘤體內(nèi)生長情況等角度，來初步闡明開展膠質(zhì)瘤基因治療研究的動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)方法。 方法：采用不同滴度的Ad與一定滴度的帶有熒光素酶（Luci

2、ferase）報(bào)告基因的AAV-Luc一起聯(lián)合感染體外培養(yǎng)的Balb/C小鼠大腦皮層神經(jīng)元，感染后72小時(shí)，裂解細(xì)胞提取Luciferase蛋白，通過測定熒光素酶活性觀察轉(zhuǎn)導(dǎo)效率；此后將一定滴度的Ad與AAV-Luc一起直接注入小鼠大腦皮層，2周后，用小動(dòng)物活體成像儀觀察神經(jīng)組織熒光素酶的表達(dá)。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將含有增強(qiáng)的綠色熒光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP）基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pE

3、GFP-N1及含有血管內(nèi)皮抑素（Endostatin）基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pSNAV-ENDO分別轉(zhuǎn)至大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，經(jīng)G418篩選及亞克隆，獲取穩(wěn)定表達(dá)EGFP及Endostatin的細(xì)胞系C6-gfp和C6-endo。采用CCK-8試劑盒檢測C6及C6-gfp細(xì)胞生長情況，接種C6-gfp細(xì)胞于Wistar大鼠顱內(nèi)，通過B超、大體標(biāo)本、熒光體視鏡、HE染色和免疫組化觀察顱內(nèi)成瘤情況及綠色熒光蛋白的表達(dá)；將細(xì)胞C6、C6-gfp和C

4、6-endo各自接種于裸鼠皮下，觀察它們之間成瘤的差異。 結(jié)果：Ad在體內(nèi)外均能明顯提高AAV對(duì)小鼠大腦皮層神經(jīng)元的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。體外穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的C6-gfp細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測97.7％產(chǎn)生綠色熒光，C6-gfp與親代C6相比，生長曲線無明顯不同（P>0.05）,C6-gfp接種于Wistar大鼠顱內(nèi)3周后成瘤率達(dá)70％，利用B超可動(dòng)態(tài)觀察腫瘤生長，利用熒光體視鏡可見腫瘤組織發(fā)綠色熒光，能與周圍正常組織區(qū)別。裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)顯示，