1、心血管疾病是一類威脅人類健康的疾病，其發(fā)病率和死亡率在各類疾病中占首位。而心律失常發(fā)生率在心血管疾病中排在首位，故心律失常的治療就顯得尤為重要。目前臨床上所用的大多數(shù)抗心律失常藥物在治療心律失常的同時(shí)，又具有致心律失常作用，或者可引起其它的心血管疾病，這使該類藥物的應(yīng)用受到限制。因此開發(fā)研究新的抗心律失常藥具有一定的臨床意義。 雙苯氟嗪是河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院合成的一種新型鈣通道阻斷劑，其結(jié)構(gòu)與氟桂利嗪相似。眾所周知，鈣通道阻斷劑可

2、以降低心肌細(xì)胞內(nèi)鈣，從而可用于鈣超載誘發(fā)的心律失常。我室以前的研究表明，雙苯氟嗪可以降低部分去極化的豚鼠乳頭肌標(biāo)本的超射值、動(dòng)作電位幅度、0 期最大除極速率，縮短平臺(tái)期以及50％和90％復(fù)極化時(shí)程。對(duì)于兔竇房結(jié)起搏細(xì)胞，雙苯氟嗪可以降低動(dòng)作電位幅度、0 期最大除極速率、舒張期除極速率和自發(fā)搏動(dòng)速率。雙苯氟嗪對(duì)哇巴因誘發(fā)的豚鼠乳頭肌遲后除極和觸發(fā)活動(dòng)以及異丙腎上腺素誘發(fā)的早后除極和觸發(fā)活動(dòng)均有抑制作用，另外對(duì)異丙腎上腺素誘發(fā)的人心房肌纖維

3、遲后除極和觸發(fā)活動(dòng)亦表現(xiàn)出抑制作用。這些結(jié)果提示雙苯氟嗪可能具有抗心律失常作用。因此論文的第一部分采用心律失常整體動(dòng)物模型，觀察雙苯氟嗪是否具有抗心律失常作用。通過研究發(fā)現(xiàn)雙苯氟嗪具有抗心律失常作用。 心律失常的主要誘發(fā)因素是心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，因此第二部分應(yīng)用激光共聚焦顯微技術(shù)，觀察雙苯氟嗪對(duì)分離的單個(gè)豚鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣是否具有調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明雙苯氟嗪可以維持心肌細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)，這與本室以往應(yīng)用膜片鉗技術(shù)發(fā)現(xiàn)的其抑制L-型鈣通道的

4、結(jié)果相一致。 這些結(jié)果可以部分解釋雙苯氟嗪對(duì)離體心肌標(biāo)本的電生理的影響，如縮短部分去極化的豚鼠乳頭肌標(biāo)本平臺(tái)期以及50％和90％復(fù)極化時(shí)程。但對(duì)于其可以降低竇房結(jié)起搏細(xì)胞超射值、動(dòng)作電位幅度和0期最大除極速率，目前還不能解釋，這些電生理參數(shù)與心肌細(xì)胞膜上的鈉通道關(guān)系更加密切，推測(cè)雙苯氟嗪可能影響心肌細(xì)胞膜上的鈉電流。因此論文第三部分應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，觀察了雙苯氟嗪對(duì)分離的單個(gè)豚鼠心室肌細(xì)胞膜上的鈉電流的影響。 第一部

5、分：雙苯氟嗪抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用研究 目的：觀察雙苯氟嗪的抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用。 方法：采用豚鼠靜脈灌注哇巴因、大鼠心肌缺血再灌注和小鼠吸入氯仿誘發(fā)心律失常模型，灌胃或十二指腸給予不同劑量雙苯氟嗪和對(duì)照藥，MP100 生理信號(hào)記錄分析系統(tǒng)監(jiān)測(cè)動(dòng)物心電圖的方法，比較各組心律失常出現(xiàn)時(shí)間或心律失常發(fā)生率，以評(píng)價(jià)雙苯氟嗪的抗實(shí)驗(yàn)性心律失常作用。 結(jié)果： 1.雙苯氟嗪對(duì)哇巴因誘發(fā)的豚鼠心律失常的影響在溶劑組，誘發(fā)

6、室性早搏(ventricular premature contraction，VP)、室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia，VT)、室性纖維性顫動(dòng)(ventricular fibrillmion，VF)和心臟停搏(cardiac arrest，CA)時(shí)的哇巴因劑量分別為158±30、190±47、232±67和285±71μg·kg<'-1>。預(yù)先十二指腸給予雙苯氟嗪20 mg·kg<'-1>或維拉帕米20 mg

7、·kg<'-1>，可以顯著增加誘發(fā)各種心律失常時(shí)的哇巴因用量，但是預(yù)先給予氟桂利嗪20rng·kg<'-1>對(duì)誘發(fā)心律失常時(shí)的哇巴因用量無明顯影響。 2.雙苯氟嗪對(duì)心肌缺血再灌注誘發(fā)的大鼠心律失常的影響假手術(shù)組動(dòng)物在觀察期間只有1/10動(dòng)物出現(xiàn)VP和VT，且 1 分鐘后恢復(fù)正常，溶劑對(duì)照組動(dòng)物在觀察期間VP、VT、VF和CA的發(fā)生率均為100％；預(yù)先灌胃給予雙苯氟嗪20 mg·kg<'-1>7天可以顯著降低VT、VF和CA的發(fā)生

8、率(都降至30％，P<0.01)，雙苯氟嗪10 mg·kg<'-1>組動(dòng)物VT(50％，P<0.05)VF(30％，P<0.01)和CA(30％，P<0.01)的發(fā)生率明顯降低，但三個(gè)劑量雙苯氟嗪均不能降低'VP的發(fā)生率；灌胃給予維拉帕米20 mg.kg<'-1>對(duì)VP(40％，P<0.01)、VT (40％，P<0.01)、VF(0％，P<0.01)和CA(0％，P<0.01)均有降低作用，而相同劑量的氟桂利嗪只能降低CA(20％，P

9、<0.01)的發(fā)生率。 3.雙苯氟嗪對(duì)吸入氯仿誘發(fā)的小鼠Ⅶ的的影響溶劑組小鼠吸入氯仿后VF的發(fā)生率為90％，預(yù)先灌胃給予雙苯氟嗪40 mg·kg<'-1>(30.8％，P<0.05)或維拉帕米40 mg·kg<'-1> (20％，P<0.05)后可明顯降低 VF 的發(fā)生率，而40 mg·kg<'-1>氟桂利嗪對(duì)VF的發(fā)生率(50％，P>0.05)無顯著影響。 小結(jié)：雙苯氟嗪可以抑制靜脈灌注哇巴因誘發(fā)的豚鼠VP、VT、VF

10、和CA，可以抑制大鼠心肌缺血再灌注誘發(fā)的VT、VF和CA，并且可以降低吸入氟仿誘發(fā)的小鼠VF發(fā)生率。雙苯氟嗪的抗心律失常作用強(qiáng)于其同類化合物氟桂利嗪。 第二部分：雙苯氟嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響 目的：觀察雙苯氟嗪對(duì)分離的單個(gè)豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響。 方法：用酶解方法分離豚鼠心室肌細(xì)胞，用F1uo 3-AM 負(fù)載后，采用激光掃描共聚焦顯微鏡測(cè)定單個(gè)心室肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光強(qiáng)度(fluo

11、rescence intensity,FI)，給藥前后細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化以熒光強(qiáng)度變化率(FI-F1<,0>)/FI<,0>表示。 結(jié)果：1．雙苯氟嗪可以劑量依賴性地降低正常臺(tái)氏液和無鈣臺(tái)氏液中豚鼠心室肌細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，且相同濃度的維拉帕米(1.0μmol·L<'-1>)與雙苯氟嗪作用相似。 2．雙苯氟嗪對(duì)細(xì)胞外高鈣誘發(fā)的細(xì)胞內(nèi)鈣超載有預(yù)防作用，當(dāng)細(xì)胞外鈣離子濃度由1.0 mmol·L<'-1>升高到1

12、0.0 mtool·L<'-1>時(shí)，可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載，此時(shí)有些細(xì)胞由于不能耐受鈣超載而發(fā)生驟縮，預(yù)先加入雙苯氟嗪或維拉帕米后可以明顯抑制這種現(xiàn)象發(fā)生，且維拉帕米對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣超載的抑制作用強(qiáng)于雙苯氟嗪。 3．雙苯氟嗪對(duì)細(xì)胞外高鈣誘發(fā)的細(xì)胞內(nèi)鈣超載有治療作用，當(dāng)升高細(xì)胞外鈣誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)鈣超載后，應(yīng)用雙苯氟嗪可以濃度依賴性地降低細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，維拉帕米也具有此作用，但其作用弱于相同濃度的雙苯氟嗪。 小結(jié)：本部分試驗(yàn)結(jié)果表明

13、雙苯氟嗪可以通過阻斷細(xì)胞膜上鈣通道和/或抑制細(xì)胞內(nèi)鈣釋放來降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，此外，雙苯氟嗪對(duì)細(xì)胞外高鈣誘發(fā)的細(xì)胞內(nèi)鈣超載有預(yù)防和治療作用，這種作用除了上述機(jī)制參與外可能還與增加細(xì)胞內(nèi)鈣外排有關(guān)。 第三部分：雙苯氟嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞膜鈉電流的影響 目的：觀察雙苯氟嗪對(duì)分離的單個(gè)豚鼠心室肌細(xì)胞膜鈉電流的影響。 方法：用酶解方法分離豚鼠心室肌細(xì)胞，全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄鈉電流。 結(jié)果： 1．將細(xì)胞鉗制

14、在-80 mV，施與-80～±50 mV、50 ms、步階10mV的去極化脈沖，記錄到的電流被10μmol·L<'-1>河豚毒素完全抑制。在該刺激條件下，本電流最大激活電壓在-20 mV左右，翻轉(zhuǎn)電位在+30 mv左右，提示該電流為鈉電流。 2．雙苯氟嗪可以濃度依賴性地抑制鈉電流，半數(shù)抑制濃度為43.5μmol·L<'-1>。雙苯氟嗪對(duì)鈉電流的抑制作用在沖洗后可部分恢復(fù)，說明其對(duì)鈉通道的抑制作用具有可逆性。 3．雙苯氟嗪

15、可使鈉電流I-V曲線上移，但對(duì)鈉電流的電壓依賴性特征、最大激活電壓以及翻轉(zhuǎn)電位無明顯影響。在雙苯氟嗪40μmol·L<'-1>存在下，最大激活電壓下的峰值電流下降約46％。 4．雙苯氟嗪可明顯使鈉電流穩(wěn)態(tài)失活曲線左移，但不影響曲線的斜率因子。雙苯氟嗪40μmol·L<'-1>可使鈉電流半數(shù)失活電壓從-73.0±4.6 mV變化到-82.8+7.2 mV(P<0.01)。但是雙苯氟嗪對(duì)鈉電流穩(wěn)態(tài)激活無明顯影響，在雙苯氟嗪40μmo

16、l·L<'-1>存在下，半數(shù)激活電壓(-33.7±3.6 mV)和斜率因子(5.6±2.4 mV)與對(duì)照組相比(-34.9±5.1 mV，6.0±4.8 mV)無顯著性差異。 5．雙苯氟嗪可以使鈉電流從失活狀態(tài)下恢復(fù)明顯減慢，雙苯氟嗪40μmol·L<'-1>可使恢復(fù)時(shí)間常數(shù)延長(zhǎng)(79±28 ms vs 36±11 ms)。 6．雙苯氟嗪可使用依賴性和頻率依賴性地抑制鈉電流。 小結(jié)：本部分研究結(jié)果表明雙苯氟嗪可以

17、濃度依賴性、使用依賴性和頻率依賴性地抑制心肌鈉電流，并且主要作用于鈉電流的失活狀態(tài)。 結(jié)論 1．雙苯氟嗪可以抑制靜脈灌注哇巴因誘發(fā)的豚鼠VP、VT、VF和CA，可以抑制大鼠心肌缺血再灌注誘發(fā)的VT、VF和CA，并且可以降低吸入氟仿誘發(fā)的小鼠室顫發(fā)生率。雙苯氟嗪的抗心律失常作用強(qiáng)于其同類化合物氟桂利嗪。 2．雙苯氟嗪可以通過阻斷細(xì)胞膜上鈣通道或抑制細(xì)胞內(nèi)鈣釋放來降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，此外，雙苯氟嗪對(duì)細(xì)胞外高鈣誘發(fā)的