1、學校代碼：10246‘；：09211250011碩士學位論文(專業(yè)學位）ALAPDT對Hela和Caski細胞增殖凋亡機制的初步探討院系：醫(yī)學院專業(yè)：婦產(chǎn)科學姓名：林倩如指導_t師：隋龍主任醫(yī)師完成日期：2012年3月10日中文摘要宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，全世界每年有25萬婦女死于宮頸癌，約50萬宮頸癌新發(fā)病例，目前已明確HPV感染特別是高危型HPV持續(xù)感染與宮頸癌發(fā)病的密切關系。在所有HPV感染婦女人群中，最終約有10%發(fā)展為

2、HPV持續(xù)感染狀態(tài)。臨床上仍缺乏有效的清除HPV感染的手段，目前沒有針對HPV的治療藥物，臨床上常用的干擾素、HPV預防性疫苗療效亦有限，針對大量HPV持續(xù)感染狀態(tài)人群，亟待有效的防范或干預措施。光動力療法（photodynamictherapyPDT)具有創(chuàng)傷小、選擇性強、重復性好、毒性小等優(yōu)點，目前已廣泛應用于多種惡性腫瘤的治療，但在婦產(chǎn)科疾病特別是宮頸疾病方面仍處于起步階段。本實驗選用的光敏劑5氨基酮戊酸（5aminolevuli

3、nic，ALA)是第二代光敏劑，能選擇性地積聚在病毒感染增殖活躍的細胞中，克服第一代光敏劑在體內(nèi)滯留時間長、所需避光時間長、組織選擇性差等缺陷。本實驗以宮頸鱗癌細胞Caski細胞和宮頸腺癌細胞Hela細胞為研究對象，通過SRB法、流式細胞儀、熒光實時定量PCR、蛋白免疫印跡法，探討新型光敏劑5氨基酮戊酸介導的光動力治療(ALATOT)清除HPV感染的機制和誘導其凋亡的分子機理，為ALAPDT最終走向臨床提供實驗依據(jù)和理論支持。目的1.觀

4、察ALAPDT對宮頸癌細胞Hela、Caski細胞生長的影響，并篩選出ALAPDT對宮頸癌細胞生長影響的最佳作用參數(shù)（光敏劑濃度激光劑量）。2.觀察ALAPDT對宮頸癌細胞Hela、Caski細胞HPV1816E6、E7基因mRNA的影響，明確其清除HPV感染的能力。3.測定ALAPDT對宮頸癌細胞Hela、Caski細胞調(diào)亡相關基因表達的影卩M，探尋ALAPDT誘導凋亡的通路。方法1.SRB法檢測ALAPDT作用于宮頸癌細胞Hela、

5、Caski細胞后細胞生長的變化，并比較兩種細胞對ALAPDT的敏感性差異。2.AnnexinVPI染色流式細胞儀檢測ALAPDT對宮頸癌細胞Hela、Caski細胞凋亡的影響。3.RealtimePCR檢測ALAPDT對宮頸癌細胞HelaCaski細胞內(nèi)Caspase3、P53、HPV1816E6E7mRNA表達水平的影響。4.WesternBlot檢測ALAPDT對宮頸癌細胞Hela、Caski細胞內(nèi)P53、cleavedCaspas