1、目的:探討ADAM-17與腫瘤化療耐藥機制的相關性，闡明腸胃清方(CWQ)逆轉奧沙利鉑(L-OHP)化療耐藥的分子機制。本實驗采用RealTime PCR方法檢測耐藥細胞株和敏感細胞株中ADAM-17mRNA表達的差異，進而通過FCM檢測腸胃清對腫瘤細胞凋亡的影響，最終通過Western Blot檢測腸胃清對ADAM-17、BCL-2蛋白表達的影響的方法來揭示腸胃清方逆轉人結腸癌HCT116/L-OHP化療耐藥細胞的分子機制，為腸胃清方

2、在臨床上的應用提供理論依據(jù)。
　　方法:1.RealTime PCR法檢測ADAM-17mRNA在敏感細胞與耐藥細胞中表達的差異:將人結腸癌敏感細胞株HCT116和人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞株HCT116/L-OHP進行體外常規(guī)培養(yǎng)，分別提取兩組細胞內總RNA，配制RT反應液進行RNA反轉錄，用熒光定量基因擴增儀采用兩步法PCR擴增程序進行擴增，進而檢測ADAM-17mRNA的表達水平。2.FCM法檢測腸胃清對腫瘤細胞凋亡的影響:實

3、驗分6組:空白組，化療組，ADAM-17抑制劑組，化療+ADAM-17抑制劑組，腸胃清組，化療+腸胃清組，各組分別作用于HCT116/L-OHP耐藥細胞48小時，PBS緩沖液洗滌離心收集細胞兩次，加入400μl結合緩沖液懸浮細胞，加入5μl Ca依賴性磷脂結合蛋白混勻后，加入碘化丙啶，4℃反應5min后采用流式細胞儀檢測耐藥細胞凋亡率。3.Western Blot法檢測腸胃清對凋亡相關蛋白ADAM-17和BCL-2細胞蛋白質表達的影響:

4、實驗分為4組:空白組，化療組，腸胃清組，化療+腸胃清組，每組分別作用于HCT116/L-OHP耐藥細胞后，進行單層貼壁細胞總蛋白的提取，用1mg/mL胎牛血清蛋白制作標準曲線，設定空白樣品分別測定各組內兩種蛋白的含量，最后進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉膜、免疫反應、顯影定影及圖像分析等步驟。
　　結果:1.RealTime PCR檢測發(fā)現(xiàn)與HCT116敏感細胞株相比較，ADAM-17在HCT116/L-OHP耐藥細胞株高表達，

5、差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。2.FCM檢測發(fā)現(xiàn)與化療組比較，化療+ADAM-17抑制劑組耐藥細胞凋亡率明顯上調，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;與化療組比較，化療+腸胃清組耐藥細胞凋亡率亦明顯上調，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。3.Western Blot檢測方法證明，與化療組比較，ADAM-17在化療+腸胃清組的蛋白表達明顯下調（P＜0.01），BCL-2在化療+腸胃清組的蛋白表達也明顯下調(P＜0.001)。<