1、目的：腺病毒5型早期區(qū)A基因(early region 1A，E1A)是新近發(fā)現(xiàn)的一個具有抑癌作用的基因，E1A蛋白能夠從正負兩種途徑調(diào)控多種基因的表達，具有誘導腫瘤細胞分化、逆轉(zhuǎn)其惡性表型、降低其體內(nèi)致瘤性和抗轉(zhuǎn)移等活性，但E1A基因在結(jié)腸癌治療的作用尚少見報道。聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)作為新型的非病毒載體已用于基因轉(zhuǎn)染實驗。本研究的目的是以自行合成的PEI納米凝膠為載體轉(zhuǎn)染E1A基因，并觀察E1A基因?qū)?/p>

2、結(jié)腸癌細胞體外生長的抑制作用和對化療藥物及電離輻射的增敏效應(yīng)，并初步探討其的作用機理。 方法：經(jīng)PEI介導，將真核細胞高效表達E1A基因的重組質(zhì)粒psv-E1A導入人結(jié)腸癌細胞系SW480，RT-PCR證實其轉(zhuǎn)染，G418篩選出陽性克隆細胞。通過測繪生長曲線和計算倍增時間，觀察EIA基因?qū)υ摷毎瞪L的抑制作用。用MTT法測定轉(zhuǎn)染E1A基因前后，順鉑、泰素、5-氟尿嘧啶、博來霉素和電離輻射對SW480細胞的效應(yīng)，流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)

3、染前后SW480細胞的細胞周期分布變化。 結(jié)果： 1．質(zhì)粒psv-E1A測序結(jié)果與基因庫E1A基因序列完全相符。 2．G418篩選出陽性克隆細胞。 3．RT-PCR結(jié)果顯示PEI能轉(zhuǎn)染質(zhì)粒psv-E1A并有穩(wěn)定的表達。 4．流式細胞儀測細胞周期，與SW480細胞相比，SW480-E1A細胞S期比例由56.06％降至38.78％，呈下降趨勢(p<0.01)；G2/M期比例從3.86％增至28.06％

4、，增加顯著(p<0.01)；G1期細胞比例無顯著變化(p>0.05)。 5．臺盼藍染色法測量SW480細胞及SW480-E1A細胞數(shù)量，計算出不同的倍增時間。轉(zhuǎn)染E1A基因細胞群體生長緩慢，倍增時間延長(是未轉(zhuǎn)染細胞的1．5倍)(p<0.01)。 6．轉(zhuǎn)染E1A基因后，SW480-E1A細胞對順鉑、博來霉索、泰素和電離輻射的敏感性顯著提高(p<0.01)，而對5-氟尿嘧啶的敏感性無明顯變化(p>0.05)。 結(jié)論