木霉菌產生厚垣孢子相關基因的篩選與克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、木霉菌是一種具有重要經濟價值的絲狀真菌,是一類分布廣泛的土壤習居菌,被認為是最有希望的生防因子。據統(tǒng)計,在全世界25個國家和美國43個州的生物防治課題中,大約34%是有關木霉的研究,可見木霉菌在生物防治上具有獨特優(yōu)勢和研究價值。它的特點是對于生長環(huán)境具有廣泛的適應性,可利用各種簡單或復雜的碳源和氮源,木霉可產生多樣的拮抗作用,產生抗生物質和溶菌酶類。目前利用木霉作為植物病害的生防真菌已有很多的報道,但將木霉作為生物農藥直接用于生產,菌劑

2、的保質期還存在一定的問題。生物制劑要求有一定的保質期,而影響菌劑保質期的主要因素是菌體類型。木霉制劑有兩種類型,一種利用分生孢子另一種利用厚垣孢子。分生孢子產量大,但存活期短,而厚垣孢子存活時間長,保質期長,因此厚垣孢子制劑有其獨特的優(yōu)勢。目前對于厚垣孢子的研究多在于孢子的培養(yǎng)條件,對于厚垣孢子形成的分子機制還知之甚少。為了研究這一問題,我們利用RNA指紋技術cDNA-AFLP(cDNA-amplifiedfragmentlengthp

3、olymophism)分析了綠色木霉在特異產厚垣孢子的培養(yǎng)基中產生厚垣孢子和不產生厚垣孢子時基因表達的差異。采用了96對引物組合,分離到48個有差異的cDNA片段。通過ReverseNorthernBlot進一步篩選出了五個陽性克隆。NorthernBlot結果顯示,其中五個片段(TriⅠ、TriⅡ、TriⅢ、TriⅣ、TriⅤ)都呈陽性反應,TriⅠ和TriⅡ在不產生厚垣孢子的時候表達量很少,但在產生厚垣孢子時表達量明顯增加。TriⅢ

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