1、移植物抗宿主病(Graft-versus-Host disease簡(jiǎn)稱GVHD)是造血干細(xì)胞移植死亡的重要原因，其發(fā)病機(jī)制主要涉及到三個(gè)方面：1．預(yù)處理組織損傷與細(xì)胞因子活化；2．供者T細(xì)胞活化；3．宿主靶器官損傷。近年來NF-κB在GVHD的發(fā)病中的作用受到重視，有研究發(fā)現(xiàn)NF-κB與樹突狀細(xì)胞抗原提呈有關(guān)<'1>，并且通過阻斷NF-κB與IL-12的基因組DNA結(jié)合下調(diào)IL-12的表達(dá)可以抑制免疫反應(yīng)<'2>。GVHD的防治策略主要

2、有細(xì)胞因子的屏蔽、阻斷T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞(APC)之間的相互作用及誘導(dǎo)免疫耐受三個(gè)方面。萬珂作為最早用于臨床的蛋白酶體抑制劑，有研究顯示其在免疫調(diào)節(jié)和防治GVHD方面可能存在一定的前景。 目的： 1．在體外HLA配型不相合、半相合、全相合混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系中觀察細(xì)胞增殖的差異及萬珂對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 2．觀察體外單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系NF-κB mRNA表達(dá)量在萬珂干預(yù)前后的差異，探討其在GVHD發(fā)病中的作

3、用及萬珂可能的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。 3.通過檢測(cè)細(xì)胞上清液細(xì)胞因子的含量探討Th1、Th2細(xì)胞在GVHD發(fā)病中的作用。 方法： 1.選擇擬行骨髓移植的HLA全相合、半相合病人及其供者，另選擇兩位HLA不相合的無血緣關(guān)系的健康志愿者建立體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系。抽取外周血10ml/人，以供者T淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，受者單個(gè)核細(xì)胞作為刺激細(xì)胞(鈷60輻照25Gy)，MTT法測(cè)吸光度，計(jì)算細(xì)胞增殖率。萬珂分別于體系建立同時(shí)及

4、培養(yǎng)72小時(shí)后加入。 2.反應(yīng)體系建立后5天按常規(guī)方法提取mRNA，RT-PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳半定量分析。 3.反應(yīng)體系建立后5天收集細(xì)胞上清液，ELISA法檢測(cè)上清IL-4、IFN-γ含量。 結(jié)果： 1.在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中供者T細(xì)胞刺激后明顯增殖(p<0.05)，其中以完全不相合組增殖最明顯(p<0.05)。萬珂處理后增殖率明顯下降(p<0.05)，萬珂早期干預(yù)比晚期干預(yù)增值率下降更明顯(p<0

5、05)。 2.供者T細(xì)胞刺激后NF-κB mRNA量增加，以完全不相合組最明顯(p<0.05)。萬珂處理后NF-κB mRNA量減少，全相合組萬珂早期干預(yù)比晚期干預(yù)下降明顯(p<0.05)，不相合組和半相合組萬珂不同時(shí)間干預(yù)無明顯差異。 3.供者T細(xì)胞刺激后IL-4及IFN-γ含量均有增加(p<0.05)，但以IFN-γ，增加更為顯著。萬珂處理后兩者均減少(p<005)。 結(jié)論： 1. 萬珂對(duì)受同種異體抗