1、雜交瘤細胞H18由該室制備,分泌單抗Hab18,特異性結(jié)合肝癌相關(guān)抗原Hab18G/CD147分子.為了提高雜交瘤細胞在生物反應(yīng)器培養(yǎng)中抗體的產(chǎn)量,該實驗欲從抗凋亡及細胞增殖抑制兩方面著手研究,以求提高雜交瘤細胞分泌抗體的產(chǎn)量,并整合上述因素,在5L生物反應(yīng)器中進行中試培養(yǎng).第一部分鼠bcl-X<,L>基因的克隆及在CHO細胞中的表達用Trizol提取BALB/c小鼠腦組織總RNA,反轉(zhuǎn)錄PCR擴增鼠bcl-X<,L>全長cDNA序列,

2、并將所克隆的序列與pGEMT載體連接,進行測序;為了快速檢測所獲的bcl-X<,L>全長cDNA序列是否能完全表達,將其與pEGFP載體連接,構(gòu)建pEGFP-bcl-X<,L>重組融合表達質(zhì)粒;用脂質(zhì)體法將重組真核表達載體pEGFP-bcl-X<,L>轉(zhuǎn)染入CHO細胞,用熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染細胞中Bcl-X<,L>-EGFP融合蛋白的表達.第二部分H18雜交瘤細胞株抗凋亡能力的改造及鑒定.利用PCR從pGEM-T-bcl-X<,L>質(zhì)粒中

3、獲得bcl-X<,L>基因,構(gòu)建真核表達載體pEF-bcl-X<,L>,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染雜交瘤細胞H18,G418篩選穩(wěn)定表達株,Western blotting檢測目的蛋白表達,流式細胞儀檢測Bcl-X<,L>提高雜交瘤抗正丁酸鈉(NaBu)誘導(dǎo)凋亡的功能.第三部分NaBu促進H18.D4雜交瘤分泌抗體機制的研究.利用NaBu促進雜交瘤細胞分泌單克隆抗體,并對其作用機制進行了研究.第四部分H18.D4雜交瘤細胞的中試研究.利用5L生物反應(yīng)