1、研究背景:全世界范圍內(nèi)腫瘤引起的死亡中,原發(fā)性肝癌是其中的第三大原因,在中國肝癌已成為第二大腫瘤致死原因,由于原發(fā)性肝癌血供豐富,腫瘤易于通過血液轉(zhuǎn)移和擴散至毗鄰和遠隔器官,如何預測或發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌治療后的早期復發(fā)和轉(zhuǎn)移,是當前肝癌防治領(lǐng)域的研究熱點。
　　非可控性炎癥與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,炎癥微環(huán)境是腫瘤細胞和機體自身抗腫瘤免疫的主要戰(zhàn)場,正常狀態(tài)下機體免疫系統(tǒng)可通過免疫監(jiān)視功能識別和清除發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的細胞,然而免疫監(jiān)視

2、作用有一定的限度,且腫瘤細胞可以通過分泌抑制性細胞因子,誘導抑制性免疫細胞的產(chǎn)生等機制來抑制機體的免疫應答反應,進而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。大部分原發(fā)性肝癌患者具有長期的慢性病毒性肝炎以及肝硬化病史,由于肝臟慢性炎癥的長期存在,大量殺傷性 T細胞被耗竭,肝臟逐漸進入免疫抑制狀態(tài)。原發(fā)性肝癌患者外周血循環(huán)中的免疫細胞諸如骨髓來源抑制細胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),表達Tie2的單核細胞(Tie

3、2-expressing monocytes,TEMs)和血清中表達的大量炎癥細胞因子都可以反映肝癌患者的免疫狀態(tài),有作為診斷原發(fā)性肝癌和檢測治療后復發(fā)的無創(chuàng)性標志物的潛在應用價值,可為微波消融聯(lián)合過繼性免疫方法治療原發(fā)性肝癌提供臨床指導。
　　方法:第一部分,前瞻性入組2012年9月至2013年12月擬接受微波消融或經(jīng)動脈化療栓塞(TACE)治療的原發(fā)性肝癌患者85例,治療前根據(jù)腫瘤進展情況分為早期肝癌組和進展期肝癌組,并設(shè)置2

4、0名健康對照組,利用流式細胞學方法檢測外周血中MDSC、TEMs的比例,比較各組之間上述免疫細胞的比例有無差異;利用流式細胞微球芯片捕獲技術(shù)檢測血清中Th1、Th2、Th9、Th17、Th22相關(guān)細胞因子的濃度,并比較各組之間上述細胞因子表達水平有無差異。
　　第二部分,前瞻性入組2012年9月至2013年12月接受微波消融的早期原發(fā)性肝癌患者45例,微波消融前采用流式細胞學方法檢測外周血MDSC、TEMs的比例;采用流式細胞微球

5、芯片捕獲技術(shù)檢測血清中相關(guān)細胞因子的濃度?；颊唠S后接受微波消融治療,記錄患者臨床病理資料,隨訪獲得微波消融后肝內(nèi)復發(fā)情況。利用統(tǒng)計學方法分析45例原發(fā)性肝癌患者臨床病理資料、外周血MDSC比例、TEMs比例以及相關(guān)細胞因子水平與微波消融后肝內(nèi)復發(fā)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在本研究第一部分中,我們發(fā)現(xiàn)與健康對照組成人相比,原發(fā)性肝癌組患者外周血中MDSC的比例顯著增高,且進展期肝癌組患者MDSC的比例明顯高于早期肝癌組患者;與健康對照

6、組成人相比,原發(fā)性肝癌患者外周血中TEMs的比例顯著增高,進展期肝癌組患者的TEMs比例高于早期肝癌組,但兩組之間差異無統(tǒng)計學意義,進展期肝癌組患者中伴有門靜脈癌栓組患者的外周血TEMs比例明顯高于不伴門靜脈癌栓組患者;與健康對照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th1相關(guān)細胞因子IL-12、IL-2、IFN-γ的濃度明顯升高,但進展期肝癌組患者Th1相關(guān)細胞因子IL-12、IL-2、IFN-γ的濃度與早期肝癌組無統(tǒng)計學差異;與健康對照組

7、成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th2相關(guān)細胞因子IL-4的水平顯著升高,且進展期肝癌組患者的IL-4水平明顯高于早期肝癌組;與健康對照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th17相關(guān)細胞因子IL-17A的濃度明顯升高,且進展期肝癌組患者的IL-17A表達水平明顯高于早期肝癌組;與健康對照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th22相關(guān)細胞因子IL-22的濃度明顯升高,且進展期肝癌組病人的IL-22表達明顯高于早期肝癌組。我們初步選定外周血MDS

8、C比例、TEMs比例、血清IL-17A、IL-22濃度作為第二部分研究的主要指標。
　　在本研究第二部分中,我們根據(jù)45例早期肝癌患者治療前外周血中MDSC、TEMs的比例、血清中IL-17A、IL-22的水平和隨訪獲得的肝內(nèi)復發(fā)情況繪制受試者工作特征曲線(ROC),確定了上述檢測指標預測復發(fā)的臨界值,分別為外周血MDSC比例(12.45％)、外周血TEMs比例(15.15%),血清IL-17A濃度(12.77pg/ml)、血清I

9、L-22濃度(85.54pg/ml),對45例原發(fā)性肝癌患者的臨床病理特征和上述四項免疫指標與微波消融治療后肝內(nèi)復發(fā)情況進行了單因素分析,其中AFP≥20ng/ml(P=0.023)、腫瘤Edmondson-Steiner分級 III-IV級(P=0.002)、外周血TEMs比例≥15.15%(P<0.0001)、IL-22≥85.54pg/ml(P<0.0001)與微波消融后復發(fā)相關(guān)。將上述指標應用Cox比例風險模型進行多因素分析,結(jié)

10、果發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌患者外周血TEMs比例≥15.15%(P=0.003)、血清IL-22≥85.54pg/m(P=0.011)是影響微波消融術(shù)后肝內(nèi)復發(fā)的獨立危險因素。
　　結(jié)論:通過對20例健康對照組成人和85例不同進展階段的原發(fā)性肝癌患者外周血MDSC、TEMs比例以及血清中相關(guān)細胞因子水平的檢測,初步篩選出可能與肝癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的四種免疫指標,即外周血MDSC比例、TEMs比例、血清IL-17A、IL-22濃度;對45例接受