1、目的：探討沉默MMS2和REV3基因表達對人耐藥性結(jié)腸癌細胞（THC8307/L-OHP）耐藥逆轉(zhuǎn)的影響。
　　方法：以人高分化耐奧沙利鉑結(jié)腸癌細胞（THC8307/L-OHP）為實驗材料，采用脂質(zhì)體-質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建帶有干擾目的基因MMS2和REV3的miRNA片段和攜帶綠色熒光蛋白標記的重組質(zhì)粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2和pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-REV3）的細胞系，通過實時熒光定

2、量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫熒光技術(shù)（immunostaining technique）檢測該細胞系干擾效率，選擇MMS2和REV3低表達具有統(tǒng)計學意義的上述細胞系作為實驗組細胞，同時將未曾作過處理的THC8307/L-OHP細胞作為空白對照組，轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白空質(zhì)粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR）的THC8307/L-OHP細胞作為陰性對照

3、組，分別轉(zhuǎn)染單基因miRNA片段和攜帶綠色熒光蛋白標記的重組質(zhì)粒為實驗對照組；應(yīng)用噻唑藍比色分析實驗（MTT）、羅丹明123實驗、流式細胞術(shù)檢測實驗組和對照組細胞對L-OHP藥物敏感度、細胞凋亡變化。
　　結(jié)果：MMS2基因在THC8307/L-OHP中的表達量顯著高于敏感細胞株THC8307（P＜0.05)。實驗組細胞MMS2和REV3基因表達被成功抑制，與對照組相比，實驗組細胞的L-OHP半數(shù)抑制濃度(half inhibit

4、ion concentration，IC50)及耐藥指數(shù)（resistance index，RI）減低(P＜0.05)，且經(jīng)L-OHP處理后，其凋亡率顯著增高(P＜0.05)。同一細胞同時導入2個不同的miRNA質(zhì)粒載體序列不會相互干擾對方的基因表達和沉默效應(yīng)變化。
　　結(jié)論：下調(diào)MMS2和REV3基因可逆轉(zhuǎn)人結(jié)腸癌細胞對L-OHP的耐藥性并促進腫瘤細胞凋亡，且MMS2和REV3雙基因共沉默抑制耐藥性結(jié)腸癌細胞增殖和誘導凋亡的作用