1、目的：鈣離子是細胞內(nèi)重要的信號分子，它參與調(diào)節(jié)多種細胞的生理、生化過程，在維持機體的正常生理功能中發(fā)揮著重要作用，而細胞內(nèi)鈣離子平衡的紊亂是導(dǎo)致腫瘤細胞的惡性轉(zhuǎn)化及惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的重要原因。鈉鈣交換器(Sodium-calcium exchanger，NCX)是一種存在于細胞膜上的雙向轉(zhuǎn)運蛋白，在許多組織細胞中廣泛表達，在維持細胞內(nèi)Ca2+的平衡中起著重要作用。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，NCX1涉及了胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展，但有關(guān)NCX1在肝

2、細胞癌的發(fā)生與發(fā)展中的作用，至今未見報道。
　　 本實驗旨在研究NCX1在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及其在調(diào)控肝細胞癌細胞內(nèi)鈣離子變化中的作用，以及如何影響肝癌細胞的增殖，希望能夠發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致肝細胞癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)鍵調(diào)控分子，從而為原發(fā)性肝癌的治療提供新的藥物靶點。
　　 方法：體外培養(yǎng)人正常的肝細胞株LO2及肝癌細胞株HepG2和Bel-7404，同時選取人正常的肝組織和原發(fā)性肝細胞癌患者手術(shù)切除的癌組織，分別運用RT-PCR

3、技術(shù)及Western-Blot技術(shù)檢測NCX1mRNA和蛋白質(zhì)的表達情況。采用共聚焦顯微鏡技術(shù)測定正常肝細胞及肝癌細胞在靜息狀態(tài)下細胞內(nèi)的鈣離子濃度，比較正常肝細胞及肝癌細胞分別給予細胞外無鈉溶液刺激及特異性的阻斷劑阻斷后細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化情況。采用MTT比色法觀察NCX1特異性的阻斷劑KB-R7943對人肝癌細胞增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)人正常肝細胞株LO2及肝組織、肝癌細胞株HepG2、Bel-74

4、04及肝細胞癌組織中均有NCX1mRNA的表達，且在肝癌細胞株HepG2及Bel-7404中NCX1mRNA的表達高于正常肝細胞株LO2(P<0.05)，但在正常肝組織及癌組織中NCX1mRNA的表達無明顯差異(P>0.05)。
　　 (2)NCX1的蛋白質(zhì)在細胞膜上與細胞漿中都有表達，且肝癌細胞株及肝細胞癌組織中NCX1蛋白質(zhì)的表達均高于正常肝細胞株及正常肝組織(P<0.05)。
　　 (3)正常肝細胞LO2和肝癌細胞

5、HepG2及Bel-7404細胞內(nèi)鈣離子檢測情況：共聚焦顯微鏡測得在給予細胞外無鈉溶液可激活NCX1，LO2，HepG2及Bel-7404細胞內(nèi)鈣離子濃度均增高，但肝癌細胞HepG2及Bel-7404細胞內(nèi)鈣離子增高的幅值明顯高于LO2細胞(P<0.05)，而當給予NCX1特異性阻斷劑KB-R7943(10μmol/L)時，則能夠顯著阻斷三株細胞細胞外無鈉誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣離子升高的幅度。
　　 (4)MTT比色法觀察到NCX1特異性