1、目的：臨床觀察和流行病學(xué)資料分析顯示肥胖患者,特別是中心性肥胖并有肝臟脂肪組織聚集(如脂肪肝)時,血漿HDL-C水平降低明顯,但其具體細(xì)胞和分子機(jī)制尚未明確。目前對脂肪組織的認(rèn)識已經(jīng)從以前的能量儲存器官更新至具有旺盛內(nèi)分泌功能的內(nèi)分泌器官。脂肪細(xì)胞是否能通過內(nèi)分泌或旁分泌的多種細(xì)胞因子和活性物質(zhì)影響與肝臟HDL密切相關(guān)的蛋白,進(jìn)而導(dǎo)致HDL-C水平和功能的異常?本實驗采用細(xì)胞共培養(yǎng)模型,探討在與脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)的情況下,HepG2細(xì)胞上與

2、HDL密切相關(guān)的apoAI,ApoM,SAA的mRNA及蛋白表達(dá)水平是否受影響,從細(xì)胞水平推論肥胖與HDL水平及功能異常的機(jī)制。
　　方法：采用胰島素、地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成為成熟脂肪細(xì)胞。通過Transwell系統(tǒng)(膜孔徑0.4μm)進(jìn)行HepG2細(xì)胞和成熟脂肪細(xì)胞的共培養(yǎng),以未分化的3T3細(xì)胞共培養(yǎng)以及單獨(dú)HepG2細(xì)胞培養(yǎng)兩組作為對照。共培養(yǎng)48小時后收集HepG2細(xì)

3、胞,提取RNA和蛋白,Western Blot檢測apoAI、ApoM蛋白水平和RT-PCR檢測SAA基因mRNA水平。
　　結(jié)果：1.采用Transwell系統(tǒng)成功建立3T3-L1脂肪細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞株HpeG2細(xì)胞共培養(yǎng)的實驗?zāi)Ｐ?2.免疫印跡(Western Blot)顯示,與對照組比較,分化成熟的脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)抑制HpeG2細(xì)胞apoAI、ApoM蛋白表達(dá)。3.RT-PCR分析顯示,與對照組比較,共培養(yǎng)使HpeG2細(xì)胞SA