1、犬細小病毒病是由犬細小病毒（Canine parvovirus，CPV）引起的一種急性、接觸性傳染病，屬于犬的主要烈性傳染病之一，具有傳染性強、發(fā)病率和死亡率高等特點。犬細小病毒從1978年發(fā)現(xiàn)以來，由于其變異速率快，宿主范圍不斷擴大，給其防治增加了困難，嚴重影響了我國經(jīng)濟動物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。
　　首先，本論文根據(jù)CPV的VP2基因序列保守區(qū)設計一對特異性PCR引物，對采自上海及周邊地區(qū)的30株CPV進行分子鑒定和基因分型，檢測

2、結果表明：New CPV-2a20株（20/30）占67％，New CPV-2b7株（7/30）占23%，CPV-2c3株（3/30）占10%。由此可以看出，目前上海地區(qū)CPV主要以New CPV-2a和New CPV-2b基因型為主，同時也出現(xiàn)了CPV-2c基因型。對其VP2基因序列分析發(fā)現(xiàn)6個核苷酸突變導致氨基酸發(fā)生變化，3株CPV-2c在相同位點發(fā)生突變，7株New CPV-2b也在相同的位點發(fā)生了突變。系統(tǒng)進化樹看出我國犬細小分

3、離株與國外分離株屬于不同分支。
　　其次，為了進一步探究上海地區(qū)三種基因型CPV的遺傳變異和分子致病機理，本論文分別選取三種基因型的分離株：SH14株（New CPV-2a）、SH1515株（New CPV-2b）和SH1516株（CPV-2c）為研究對象，將這三株CPV的小腸組織研磨，運用同步接種方法接種 CRFK細胞，分離病毒；然后，分別利用PCR和病毒學方法對病毒進行鑒定。結果發(fā)現(xiàn)，三種基因型CPV均可在CRFK細胞上良好生

4、長，并產(chǎn)生細胞變圓、脫落等特征性細胞病變；PCR方法均能檢測到CPV基因組；間接免疫熒光試驗和蛋白質印跡試驗均證明病毒VP2蛋白在CRFK細胞中進行了表達；在電鏡下可以觀察到直徑在20nm左右，具有細小病毒形態(tài)特征的病毒顆粒；將分離的病毒接種試驗動物，發(fā)現(xiàn)在攻毒后3天，可以從試驗犬糞便中檢測到CPV，并持續(xù)排毒一周。所分離三種基因型CPV在CRFK細胞中的病毒滴度（TCID50）分別為10-4.9/0.1mL（SH14株）、10-4.8

5、/0.1mL（SH1515株）、10-4.6/0.1mL（SH1516株）。為進一步了解三種基因型CPV在細胞中的增殖特性，本研究分別測定了它們在CRFK細胞中的一步生長曲線，結果表明三種基因型CPV在CRFK細胞上增殖規(guī)律相似：即病毒在感染細胞后0-12h為潛伏期，12h后病毒粒子開始增殖，36h到60h為病毒快速增殖期，病毒滴度在感染后60h后達到最高，72h后隨著細胞的裂解和死亡，病毒滴度開始下降。
　　最后，根據(jù)三種基因型

6、CPV參考株序列，我們設計5對特異性PCR引物，從分離的三種基因型CPV中成功擴增出它們的全基因組序列。其中SH14株（New CPV-2a）全長5062bp，SH1515株（New CPV-2b)全長5014bp，SH1516株(CPV-2c)全長5002bp。利用DNASTAR軟件對基因序列進行了比對分析，結果顯示三種基因型CPV基因組均含有兩個編碼框架：ORF1和ORF2，分別編碼NS1、NS2、VP1、VP2四種蛋白。其中ORF

7、1編碼的NS1長2007bp，中間包含498bp的NS2基因，分別編碼669和166個氨基酸。ORF2編碼VP1長2184bp，其中包含1755bp VP2基因，分別編碼728和585個氨基酸。三株病毒3’端和5’端序列存在差異，和其它細小病毒一樣，三株病毒兩端存在兩個非編碼區(qū)，并存在典型的“Y”型發(fā)卡結構。
　　對三種基因型CPV同源性進行分析，結果顯示SH14株（New CPV-2a）與CPV/CN/SD10/2014株核苷酸

8、同源性最高，達98.8%；SH1515株（New CPV-2b）與CPV/CN/JL6/2013株和CPV/CN/HB1/2013核苷酸同源性最高，達99.9%；SH1516株(CPV-2c)與CPV-LZ2(2b)株核苷酸同源性最高，達99.2%；從系統(tǒng)發(fā)生樹可以看出：CPV在不斷的進化過程中逐漸形成了不同的分支，其中，我國犬細小不同分離株之間親緣性相對較近，位于同一大的分支，而與國外分離株的親緣性相對較遠。
　　綜上所述，本論